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Repositório Institucional - UECE
Título:
UMA ABORDAGEM FENOTÍPICA E MOLECULAR EM LEVEDURAS DO GÊNERO CANDIDA ISOLADAS DE CÃES

Autor(es):
BRITO, ERIKA HELENA SALLES DE

Palavras Chaves:
Não informado

Ano de Publicação:
2008

Resumo:
O gênero Candida é composto por leveduras que vivem como comensais na microbiota de
homens e animais. Nos últimos anos, tem sido observado aumento considerável de relatos de
enfermidades causadas por estas leveduras acometendo variadas espécies animais. Há relatos
do surgimento de cepas resistentes a derivados azólicos, in vitro, mas ainda são poucos os
estudos que abordam o perfil de sensibilidade de Candida spp., isoladas de animais, bem
como o perfil genotípico destes isolados. Ademais, o gênero Malassezia também merece
destaque na Medicina veterinária, especialmente a M. pachydermatis. Com este estudo,
buscou-se conhecer a microbiota fúngica, por leveduras, em cães saudáveis, com ênfase nos
aspectos fenotípicos e genotípicos de Candida spp. Para tanto, foram analisadas 203 amostras
de boca, 110 de mucosa vaginal, 93 do prepúcio e 123 da região perianal de cães. As espécies
de levedura isoladas foram identificadas por suas características fenotípicas, de forma manual
e por sistema automatizado (VITEK 2), bem como pelo padrão genotípico (polimorfismo de
tamanho dos fragmentos amplificados) das regiões ITS1 e ITS2 do DNAr. Foram avaliadas,
também, cinco cepas de C. albicans e 3 C. tropicalis, oriundas da micoteca do CEMM. A
técnica de microdiluição em caldo (CLSI; M27-A2, 2002), com modificações, foi empregada
para avaliar a sensibilidade de Candida spp. e M. pachydermatis em relação ao cetoconazol
(CET), itraconazol (ITC), fluconazol (FLC), anfotericina B (ANB) e caspofungina (CAS). De
acordo com a identificação manual, três espécies de Candida foram encontradas: C.
parapsilosis (n=17), isolada em todos os sítios anatômicos; C. tropicalis (n=3), na região
perilabial, perianal e prepúcio; e C. albicans (n=2), presente somente na região perianal.
Foram isoladas 207 cepas de M. pachydermatis, das quais 34,8% foram da região perianal,
32,4 % da região perilabial, 22,7% da mucosa vaginal e 10,1% do prepúcio. Saccharomyces
cerevisiae (n=1) e Rhodotorula sp. (n=1) também foram encontradas. Os valores de
concentração inibitória mínima (CIM) do CET, ITC e FLC, contra as cepas de Candida spp.,
foram 0,03–16 \g/mL; 0,06 a >16 \g/mL; e 0,5–64 \g/mL, respectivamente. Todos os
isolados deste gênero foram sensíveis a CAS e ANB. As 20 cepas de M. pachydermatis
apresentaram CIM entre <0,03 – 0,25 \g/mL para CET e ITC, CIM = 8 \g/mL para FLC,
CIM > 64 \g/mL para CAS e CIM = 0,25 \g/mL para ANB. A amplificação pela reação em
cadeia da polimerase seguida de eletroforese em gel de agarose (PCR-AGE) permitiu a
identificação de seis espécies diferentes. Percentuais de 96,7 e 86,7 de concordância foram
encontrados entre PCR-AGE e VITEK versus método fenotípico manual, respectivamente.
Este estudo demonstrou a presença de Candida spp., M. pachydermatis, S. cerevisiae e
Rhodotorula sp. como parte da microbiota de cães saudáveis, e que, isolados de C. albicans e
alguns de C. tropicalis, oriundos destes animais, apresentam resistência, in vitro, aos
derivados azólicos testados. O PCR-AGE mostrou maior percentual de concordância com o
método manual, além de ser mais rápido e sensível do que os demais métodos analisados,
podendo o seu uso ser indicado para diagnóstico de rotina, de cepas de Candida spp. de
origem veterinária.
Palavras-chave: Leveduras. Candida. Sensibilidade. Cães. PCR.



Abstract:
The Candida genus is composed of commensal yeasts that live in the microbiota of humans
and animals. In recent years there has been a considerable increase in reports of diseases
caused by these yeasts in various animal species. There are also reports of the emergence of
strains that are resistant to azolic drugs in vitro, but few studies provide information on the
sensitivity profile of Candida spp. isolated from animals, as well as the genotype profile of
these isolates. The Malassezia genus also deserves attention in veterinary medicine, especially
M. pachydermatis. This study examined the yeasts making up the fungal microbiota in
healthy dogs, with emphasis on the phenotypes, genotypes and antifungal sensitivity of strains
of Candida spp. To do this, 203 samples were analyzed from the mouth, 110 from the vaginal
mucosa, 93 from the prepuce and 123 from the perianal region. The samples were inoculated
in Sabouraud agar, Sabouraud agar with chloramphenicol, Sabouraud agar with
chloramphenicol, and cycloheximide and Dixon’s agar, and incubated at 37° C for 96 hours.
The species were identified by their phenotypic characteristics (manual identification). The
Candida strains were identified as to genotype by analysis of the ITS region of the DNAr. At
this time, 5 strains of C. albicans and 3 of C. tropicalis from the collection of the Specialized
Medical Mycology Center (CEMM) of Ceará State University were also analyzed. The broth
microdilution method, recommended by the Clinical and Laboratory Standards Institute
(M27-A2, 2002), with modifications, was used to evaluate the sensitivity of Candida spp. and
M. pachydermatis to ketoconazole (KTC), fluconazole (FLC), itraconazole (ITC),
amphotericin B (AMB) and caspofungin (CAS). Three Candida species were found: C.
parapsilosis (n=17), isolated from all the anatomical sites sampled; C. tropicalis (n=3), from
the perilabial, perianal and prepuce regions; and C. albicans (n=2), only present in the
perianal region. A total of 207 strains of M. pachydermatis were isolated, of which 34.8%
came from the perianal region, 32.4 % from the perilabial region, 22.7% from the vaginal
mucosa and 10.1% from the prepuce. Saccharomyces cerevisiae (n=1) and Rhodotorula sp.
(n=1) were also found. The minimum inhibition concentration (MIC) values of KTC, ITC and
FLC against the Candida spp. strains were 0.03–16 \g/mL, 0.06 to >16 \g/mL and 0.5–64
\g/mL, respectively. All the isolates of this genus were sensitive to CAS and AMB. The 20
M. pachydermatis strains had a MIC between <0.03 – 0.25 \g/mL for KTC and ITC, MIC = 8
\g/mL for FLC, MIC > 64 \g/mL for CAS and MIC = 0.25 \g/mL for AMB. According to
PCR-AGE analysis, six patterns were recognized among the 33 fungal strains. The results
revealed a 96.7 % and 86.7 % concurrent identification between PCR-AGE and VITEK
methods versus the manual method, respectively. This study demonstrated that Candida spp.,
M. pachydermatis, S. cerevisiae and Rhodotorula sp. are present in the microbiota of healthy
dogs and that isolates of C. albicans and some of C. tropicalis from these animals are resistant
in vitro to the azolic derivatives tested. PCR-AGE showed a greater level of concordance with
the traditional method, besides being more rapid and sensitive the other methods examined,
and is therefore indicated for routine diagnostic testing of Candida spp. strains of veterinary
origin.
Keywords: Yeasts. Candida. Susceptibility. Dogs. PCR.


Tipo do Trabalho:
Tese

Referência:
BRITO, ERIKA HELENA SALLES DE. UMA ABORDAGEM FENOTÍPICA E MOLECULAR EM LEVEDURAS DO GÊNERO CANDIDA ISOLADAS DE CÃES. 2008. 135 f. Tese (Doutorado em 2008) - Universidade Estadual do Ceará, , 2008. Disponível em: Acesso em: 12 de maio de 2024

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