O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial de anticorpos anti-zona pelúcida para a
imunoesterilização de cães, através da análise da capacidade de antisoro produzido por
imunização de coelhos com zona pelúcida porcina (pZP) de promover a atresia de
folículos pré-antrais (FOPA). Para este propósito, utilizou-se a biotécnica de
manipulação de oócitos inclusos em folículos pré-antrais para se estabelecer um modelo
experimental in vitro, compreendendo métodos de preservação e cultivo in vitro de
FOPA caninos. Na Fase I, avaliaram-se os efeitos da temperatura (4, 20 ou 38°C), meio
(salina fisiológica ou Meio Essencial Mínimo – MEM) e tempo (2, 6, 12 ou 24 h) de
armazenamento sobre a morfologia e viabilidade folicular. As técnicas de histologia
clássica e microscopia eletrônica de transmissão, e a análise de viabilidade utilizando-se
Azul de Tripan e marcadores fluorescentes (calceína-AM e etídio homodímero-1) foram
utilizadas para essa finalidade. O uso de MEM a 4ºC apresentou-se como o método
mais eficiente, possibilitando a preservação de percentuais de folículos viáveis com
ultraestrutura íntegra similares ao controle fresco por até 12 h. Na Fase II, avaliou-se a
eficiência dos crioprotetores dimetil sulfóxido, etileno glicol, glicerol e 1,3-propanodiol
para a criopreservação de FOPA caninos através de congelação lenta. Observou-se que
o dimetil sulfóxido (DMSO) na concentração de 1,5 M possibilitou a preservação dos
maiores percentuais de FOPA viáveis e com ultra-estrutura intacta após a
descongelação. Na fase III, avaliou-se o efeito de soro anti-pZP sobre a viabilidade de
FOPA caninos cultivados in vitro durante 24 h, e também sobre a ligação de
espermatozóides caninos a óocitos homólogos. Utilizaram-se FOPA frescos ou
criopreservados com 1,5 M DMSO, que apresentaram resultados similares. Observou-se
que a adição de 10% de soro anti-pZP ao meio de cultivo não teve efeito sobre folículos
com diâmetro inferior a 100 μm em relação aos controles (ausência de soro ou adição de
10% de soro pré-imune). Entretanto, o soro anti-pZP causou a atresia de FOPA com
diâmetros superiores a 100 μm, conforme avaliado com calceína-AM e etídio
homodímero-1. Este soro a 10% mostrou-se capaz também de inibir a ligação de
espermatozóides à zona pelúcida canina. Desta forma, demonstrou-se in vitro o
potencial do soro anti-pZP para a imunoesterilização (através da eliminação de FOPA) e
para a imunocontracepção (através do bloqueio da ligação de espermatozóides aos
oócitos) de cães.
Palavras-chave: Imunocontracepção. Zona pelúcida. Folículos pré-antrais. Cães.
