PROTEÍNAS DO PLASMA SEMINAL NA CRIOPRESERVAÇÃO DO
SÊMEN OVINO EM ÁGUA DE COCO EM PÓ (ACP-102c) OU TRIS
Autor(es):
CAVALCANTE, JOSÉ MAURÍCIO MACIEL
Palavras Chaves:
Não informado
Ano de Publicação:
2012
Resumo:
O plasma seminal ou suas proteínas favorecem a motilidade e fertilidade do sêmen ovino criopreservado, tornando importante o estudo da interação destas proteínas com os diluentes seminais. Este trabalho teve como objetivo avaliar a relação da concentração proteica e perfil eletroforético do plasma seminal de ejaculados ovinos com sua congelabilidade e estudar o efeito da adição do plasma seminal ou de suas proteínas liofilizadas aos diluidores ACP-102c ou TRIS antes da criopreservação ou ao sêmen descongelado criopreservado nestes diluidores. Para a avaliação da concentração proteica e perfil eletroforético do plasma seminal de ejaculados com sua congelabilidade, sêmen de ovinos Santa Inês (n=2) e Dorper (n=2) foram colhidos para obtenção do plasma seminal e criopreservação em ACP-102c ou TRIS. A concentração de proteína do plasma seminal foi determinado pelo método de Bradford e seu perfil proteico foi determinado por eletroforese bidimensional em gel de poliacrilamida. O sêmen (fresco ou criopreservado) foi avaliado para parâmetros de motilidade em sistema computadorizado de análise de sêmen (CASA), viabilidade espermática (pelo teste de coloração eosina-nigrosina), integridade do acrossoma (por coloração com Marrom de Bismark e Rosa Bengala) e teste hiposmótico (HOST). Quanto aos efeitos da adição do plasma seminal ao sêmen descongelado, sêmen de carneiros Santa Inês e Dorper criopreservados em ACP-102c ou TRIS foram descongelados e diluídos (1:1) no respectivo diluidor (controle) ou com diluidor suplementado com plasma seminal (concentração final de 30%). Quanto aos efeitos na congelação do sêmen pela adição de plasma seminal ovino ou de sua fração proteica liofilizada aos diluidores experimentais, sêmen de carneiros Santa Inês e Dorper foram criopreservados em ACP-102c e TRIS (controle), criopreservados nestes diluidores adicionados a 30% de plasma seminal ovino (ACP+PS e TRIS+PS) ou adicionados a proteínas liofilizadas do plasma seminal (ACP+PT e TRIS+PT). Em ambos os experimentos, o sêmen foi avaliado quanto a motilidade seminal (CASA), HOST e viabilidade espermática pelo teste de coloração eosina-nigrosina bem como pela avaliação simultânea da integridade da membrana plasmática e acrossoma e da função mitocondrial com sondas fluorescentes IP/FITC-PSA/JC-1. Correlações positivas foram encontradas entre a concentração de proteína com os parâmetros motilidade progressiva e congelabilidade e negativa para deslocamento lateral de cabeça nas amostras criopreservadas em ambos diluidores. Além disso, a intensidade de oito spots e três sequências de isoformas tiveram variação significativa com a congelabilidade dos ejaculados obtidos. Não foram observados efeitos da adição do plasma seminal ao sêmen descongelado criopreservado em ACP-102c. No entanto, a adição do plasma seminal ovino após descongelação do sêmen criopreservado
Em TRIS aumentou a motilidade progressiva e viabilidade.Tanto ACP+PS e TRIS+PS resultaram em aumento na motilidade total e progressiva e no HOST. Entretanto, a suplementação dos diluidores ACP-102c e TRIS com proteínas liofilizadas não promoveram melhoria na qualidade do sêmen. Conclui-se que a concentração e o perfil eletroforético de proteínas do plasma seminal de ejaculados ovinos estão relacionados com a congelabilidade do sêmen e que a adição de plasma seminal aos diluidores ACP-102c e TRIS, mas não de suas proteínas liofilizadas, melhorou a qualidade do sêmen ovino criopreservado.
The seminal plasma or its proteins favoring the motility and fertility of the cryopreserved ram semen, making it important to study the interaction of these proteins with semen extenders. This work aimed to evaluate the relation protein concentration and electrophoretic profile of ram seminal plasma with their ejaculates freezability and to study the effect of addition of seminal plasma or its lyophilized proteins to ACP-102c or TRIS extenders before cryopreservation or add to frozen thawed semen cryopreserved in these extenders. To evaluate the relation between protein concentration and electrophoretic profile of seminal plasma of ejaculates with its freezability, semen of Santa Ines (n = 2) and Dorper (n = 2) rams were collected to obtain seminal plasma and for semen cryopreservation using both ACP-102c as in TRIS extenders. The Bradford method was used for protein content determination while the seminal plasma protein profile of ejaculated was determined by two-dimensional electrophoresis in polyacrylamide gel. The semen (fresh or cryopreserved) was evaluated for motility by computer-assisted semen analysis (CASA), sperm viability (by eosin-nigrosin test) acrosomal integrity (using Bismark brown and Bengal Rose staining technique) and by hypoosmotic swelling test (HOST). To evaluated the effects of addition of seminal plasma to frozen-thawed ram semen cryopreserved in ACP-102c and TRIS, semen from Santa Ines and Dorper rams cryopreserved in these extenders were thawed and diluted (1:1) in its respective extender (control) or to extender supplemented with ram seminal plasma (30% final concentration). Regarding the effects of semen cryopreservation by addition of ram seminal plasma or its lyophilized protein fraction in the experimental extenders, semen of Santa Ines and Dorper rams were cryopreserved in ACP-102c and TRIS (control), added with 30% of ram seminal plasma (ACP+PS and TRIS+PS), or added with lyophilized seminal plasma protein (ACP+PT and TRIS+PT). In both experiments, the semen was evaluated for motility parameters (CASA), HOST and sperm viability by eosin-nigrosin staining test and simultaneous assessment of plasma and acrosomal membrane integrity and mitochondrial function by association of fluorescent probes PI/FITC-PSA/JC-1. Positive correlations were found between the protein concentration with progressive motility and freezability parameters and negative for lateral displacement of the head for samples cryopreserved in both extenders. Furthermore, the intensity of eight spots and three isoforms sequences had significant variation in freezability of the obtained ejaculates. No effects were observed on the parameters evaluated by the addition of seminal plasma to thawed semen cryopreserved in ACP-102c. However, the addition of ram seminal plasma after thawing in the semen
Cryopreserved in TRIS increased the motility and viability parameters. Both ACP+PS and TRIS+PS treatments resulted in increased of total and progressive motility and HOST. However, supplementation of the ACP-102c and TRIS extenders with lyophilized proteins did not promote improvement in semen quality. In conclusion, both the seminal plasma proteins content and protein profile of ram ejaculates were related to semen freezability and that the addition of seminal plasma extenders to ACP-102c and TRIS, but not its protein lyophilized improved sperm quality of cryopreserved ram semen.
CAVALCANTE, JOSÉ MAURÍCIO MACIEL. PROTEÍNAS DO PLASMA SEMINAL NA CRIOPRESERVAÇÃO DO
SÊMEN OVINO EM ÁGUA DE COCO EM PÓ (ACP-102c) OU TRIS. 2012. 167 f. Tese (Doutorado em 2012) - Universidade Estadual do Ceará, , 2012. Disponível em: Acesso em: 11 de maio de 2024
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