ESTRATÉGIAS DE PRODUÇÃO DE CAPRINOS TRANSGÊNICOS
PARA A EXPRESSÃO DE LISOZIMA HUMANA NO LEITE E
UTILIZAÇÃO DE LEITE DE BOVINOS TRANSGÊNICOS
CONTENDO LACTOFERRINA HUMANA EM MODELO DE
DESNUTRIÇÃO EM SUÍNOS
Autor(es):
FELTRIN, CRISTIANO
Palavras Chaves:
Não informado
Ano de Publicação:
2014
Resumo:
A mortalidade infantil ainda é um grande problema no mundo, e a interação entre a desnutrição e a diarreia está entre as principais causas de morte em crianças abaixo de cinco anos. Uma opção para combater tanto a diarreia como a desnutrição é a amamentação, uma vez que os benefícios do leite materno são atribuídos às ações antimicrobianas de certas proteínas, como a lisozima (hLZ) e a lactoferrina (hLF). Uma forma de transmitir os benefícios da hLZ e da hLF às crianças é a utilização de animais transgênicos que expressem essas proteínas no leite. A disponibilidade de leite animal com propriedades de leite humano pode ser uma forma de aumentar e prolongar os benefícios protetores do leite humano. Esta tese está divida em três capítulos, com os objetivos de: 1) otimizar os procedimentos de clonagem em caprinos para a obtenção de clones transgênicos para a hLZ, sob as condições do semi-árido brasileiro; 2) avaliar os efeitos da administração da metilprednisolona nas populações de células imunes circulantes em cabras e na taxa de prenhez, após a transferência de embriões, sem zona pelúcida (estádio de 1-célula), para cabras receptoras; e 3) avaliar o efeito da administração de leite transgênico bovino para a hLF em leitões submetidos a um protocolo de restrição alimentar protéico-calórica. No Capítulo 1, o número de embriões reconstruídos e aptos à transferência foi maior quando oócitos maturados in vitro foram utilizados na reconstrução do que oócitos maturados in vivo. Entretanto, não houve diferença na taxa de prenhez entre as diferentes fontes de oócitos (77,5% vs. 77,8%). Além disso, não foram observadas diferenças na taxa de prenhez para embriões reconstruídos com ou sem zona pelúcida (78,8% vs. 76,0%, respectivamente). Contudo, a taxa de prenhez foi maior no grupo de embriões ativados pelo protocolo convencional (88,1% vs. 50,0%) e para os embriões reconstruídos com células-tronco mesenquimais e fibroblastos fetais (100,0% e 93,3%, respectivamente), quando comparados aos 9 fibroblastos adultos (64,7%). Embora não se tenha produzido clones transgênicos para a linhagem da lisozima humana, obteve-se o nascimento de uma fêmea caprina clonada a partir de células controle não-transgênicas. No Capítulo 2, o tratamento com metilprednisolona reduziu significativamente a quantidade de leucócitos e neutrófilos circulantes, demonstrando um efeito imunossupressor. Não foram observadas diferenças na taxa de prenhez no dia 30, quando foram comparados os diferentes grupos (controle vs. metilprednisolona) e sub-grupos (oócitos maturados in vivo vs. in vitro; embriões com ou sem zona pelúcida). No Capítulo 3, leite bovino transgênico para a LF humana (rhLF) foi administrado para um modelo de desnutrição em suínos. A suplementação da dieta tanto com leite controle como leite com rhLF promoveu uma recuperação do intestino, como indicado pela morfologia e permeabilidade intestinais. Um modelo de desnutrição em suínos foi estabelecido e a administração de leite com rhLF foi benéfica na recuperação do trato gastrointestinal dos animais malnutridos. Palavras-chave: Clonagem animal, animais transgênicos, lisozima, lactoferrina, imunossupressão, diarreia, desnutrição, caprinos, bovinos.
Abstract:
Childhood mortality is still a major problem in the world and the interaction between malnutrition and diarrhea is among the leading causes of death in children under the age of five. One option to reduce both diarrhea and malnutrition is breastfeeding, as the benefits of breast milk are attributed to actions of certain antimicrobial proteins, such as lysozyme (hLZ) and lactoferrin (hLF). One way to convey the benefits of hLZ and hLF to children is the use of transgenic animals that express such proteins in the milk. The availability of animal milk with human milk properties may be a way to increase and prolong the protective benefits of human milk. This dissertation is divided into three chapters, with the aims 1) to optimize the cloning procedures in goats to obtain transgenic hLZ clones under the conditions of the Brazilian Semi-Arid region; 2) to evaluate the effects of the administration of methylprednisolone on circulating immune cell populations in does, and the pregnancy rate after embryo transfer without zona pellucida (1-cell stage embryos) to dow recipients; and 3) to evaluate the effect of the administration of transgenic bovine milk for hLF to young pigs subjected to a protocol of protein-energy food restriction. In Chapter 1, the numbers of reconstructed embryos and embryos suitable to transfer were higher when in vitro-matured oocytes were used for embryo reconstruction than with in vivo-matured oocytes. However, no differences in pregnancy rates were observed between oocyte source (77.5% vs. 77.8%, respectively). In addition, no differences in pregnancy rate were detected for transferred embryos reconstructed with or without the zona pellucida (78.8% vs. 76.0%, respectively). However, pregnancy rates were higher when embryos were activated using a conventional protocol (88.1 % vs. 50.0%), and for embryos reconstructed with mesenchymal stem cells and fetal fibroblasts (100.0% and 93.3%, respectively), when compared with adult fibroblasts (64.7%). Although we have 11 not produced transgenic clones for the human lysozyme transgenic line, we obtained a viable female goat cloned using non-transgenic control cells. In Chapter 2, the treatment with methylprednisolone significantly reduced the amount of circulating neutrophils and white blood cells, demonstrating an effective immunosuppressive effect. However, no differences in pregnancy rates on Day 30 where observed between the different treatment groups (control vs. methylprednisolone) and sub-groups (oocytes matured in vivo vs. in vitro; embryos with or without zona pellucida). In Chapter 3, transgenic bovine milk containing recombinant human LF (rhLF) was administered to a pig model for malnourishment. Supplementation of the diet with both control and rhLF milk promoted recovery of the intestine, as indicated by intestinal morphology and intestinal permeability. A pig model for malnutrition was established and the administration of rhLF milk was beneficial for the recovery of the gastrointestinal tract in the malnourished animals. Keywords: Animal cloning, transgenic animals, lysozyme, lactoferrin, imunosupression, diarrheia, malnourishment, goats, cattle.
Tipo do Trabalho:
Tese
Referência:
FELTRIN, CRISTIANO. ESTRATÉGIAS DE PRODUÇÃO DE CAPRINOS TRANSGÊNICOS
PARA A EXPRESSÃO DE LISOZIMA HUMANA NO LEITE E
UTILIZAÇÃO DE LEITE DE BOVINOS TRANSGÊNICOS
CONTENDO LACTOFERRINA HUMANA EM MODELO DE
DESNUTRIÇÃO EM SUÍNOS. 2014. 184 f. Tese (Doutorado em 2014) - Universidade Estadual do Ceará, , 2014. Disponível em: Acesso em: 1 de maio de 2024
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