ARTRITE INDUZIDA POR ZYMOSAN NA ARTICULAÇÃO TÍBIO-TARSAL DE
RATOS – AVALIAÇÃO DOS EFEITOS ANTI-INFLAMATÓRIOS DA LECTINA DE Hypnea cervicornis
Autor(es):
BRINGEL, PEDRO HENRIQUE DE SOUZA FERREIRA
Palavras Chaves:
Não informado
Ano de Publicação:
2015
Resumo:
A Artrite Reumatoide (AR) é a artropatia mais frequente em humanos, na qual a dor é um achado comum. O objetivo deste trabalho foi investigar a fisiopatologia da artrite induzida por zymosan na articulação tíbio-tarsal de ratos e avaliar a atividade anti-inflamatória da lectina de Hypnea cervicornis (HCA) nesse modelo. Foram utilizados ratos Wistar machos (200-220g) mantidos em condições controladas de temperatura e luminosidade, recebendo água e ração ad libitum. Cada grupo experimental foi composto por oito animais. Os animais receberam zymosan (500 μg/25μl de salina) ou salina na articulação tíbio-tarsal direita. A fim de mensurar a nocicepção, os animais foram colocados em caixas individuais de acrílico, com assoalho de rede de malha não maleável, e aos mesmos se aplicou uma pressão no centro da região plantar, utilizando uma sonda de área larga (4,15 mm2) para provocar flexão articular, com consequente resposta de retirada da pata. Valores reduzidos na pressão aplicada refletem a hipernocicepção. A resposta de retirada da pata foi avaliada imediatamente antes da indução (tempo zero) e em tempos variados após a injeção do estímulo (1-6 h, 12 h, 24 h, 48 h, 96 h, 7d e 14d). A fim de excluir a ativação de mecanonociceptores locais na resposta de retirada, um grupo de animais recebeu lidocaína 2% (100 μL s.c.). Para a validação do modelo, foram administradas morfina (4 mg/kg, i.p., 5,5 h após a indução) ou indometacina (5 mg/kg, i.p., 30 min antes da indução). HCA (1 e 3 mg/kg; i.v.) foi administrada 2 h ou 5,5 h após a indução da artrite. A participação do domínio lectínico foi avaliada pela administração da HCA pré-incubada (37°C, 1 h) com 0,1 M do açúcar ligante N-acetilgalactosamina (GalNAc), o qual também foi administrado isoladamente como controle. ODQ (4 μg i. art) foi administrado 30 min antes do HCA (1 mg/kg e.v.) para avaliar a participação da via L-arginina:NO:GMPc. Os animais foram eutanasiados 6 horas ou 14 dias após a indução, e o fluido articular foi coletado para contagem de leucócitos e dosagem de citocinas. As diferenças estatísticas foram determinadas por análise de variância (ANOVA), univariada ou bivariada, seguida do teste de Bonferroni. P<0,05 foi considerado significante. Zymosan provocou influxo leucocitário significante, tanto na 6ª h quanto no 14º após a indução, em relação ao grupo salina (46693 ± 8126 e 650 ± 143 células vs 362 ± 53 células e 15 ± 3 células, respectivamente). Na 6ª hora, foram detectadas nos fluidos articulares do grupo zymosan, concentrações elevadas de citocinas [IL-1β (45-vezes), IL-6 (23-vezes), TNF-α (4-vezes), IL-5 (2,5-vezes), IL-4 (4-vezes); IL-13 (7-vezes)] como também de fatores de crescimento [VEGF (8-vezes), GM-CSF (7-vezes), M-CSF (4-vezes), MCP-1 (3-vezes)], em relação àqueles do grupo salina. Lidocaína não alterou o limiar de dor dos animais. Morfina (62,02 ± 5,50 g) e indometacina
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(59,59 ± 8,24 g) reverteram a hipernocicepção provocada por zymosan, na 6ª hora (20,87 ± 2,54 g). O tratamento com HCA (1 mg/kg e.v.) duas horas após a indução da artrite, reduziu tanto a hipernocicepção (36,10 ± 2,74 g vs 18,90 ± 1,84 g) quanto o influxo leucocitário (14558 ± 4002 vs 46900 ± 6831 células) induzidos por zymosan. Resultados de mesma magnitude foram alcançados com uma dose maior de HCA (3 mg/kg e.v.), mesmo quando administrada 5,5 h após o zymosan. A pré-incubação com GalNAc reverteu parcialmente os efeitos da HCA (hipernocicepção: 37,36 ± 5,45 g; influxo: 8869 ± 4552 células). O efeito antinociceptivo da HCA pôde ser revertido por administração prévia de ODQ. Diante dos resultados apresentados a HCA pode ser indicada como importante ferramenta para o estudo da artrite em modelos animais.
Rheumatoid arthritis (RA) is the most common arthropathy in humans, wherein the pain is a common finding. This study aims to investigate the pathophysiology of arthritis induced by zymosan in the tibio-tarsal joint of rats and evaluate the anti-inflammatory activity of Hypnea cervicornis lectin (HCA) in this model. Male Wistar rats (200-220 g) were maintained under controlled temperature and lighting conditions, receiving water ad libitum. Each experimental group consisted of eight animals. Animals received zymosan (500 μg/ 25 μl saline) or saline in the right tibio-tarsal joint. In order to measure nociception, animals were placed in individual acrylic boxes with floor of non-malleable mesh network, and had a pressure applied in the center of the plantar surface, using a probe of large-area (4.15 mm2) to cause joint flection and paw withdrawal response. Values reduced in pressure reflected hypernociception. The paw withdrawal response was evaluated immediately prior to induction (zero time) and at various times after stimuli injection (1, 2-6 h, 12 h, 24 h, 48 h, 96 h, 7 d and 14 d). To exclude the activation of local mecanonociceptores in the withdrawal response, a group of animals received 2% lidocaine (100 μL s.c.). To validate the model, morphine (4 mg/kg, i.p.) or indomethacin (5 mg/kg i.p.) were administered 5.5 h after induction and 30 min before induction, respectively. HCA (3 mg/kg; i.v.) was administered 2 h or 5.5 h after zymosan. The role of the lectin domain was evaluated by the administration of HCA pre-incubated (37 °C, 1 h) with 0.1 M of the binding sugar N-acetylgalactosamine (GalNAc), which was also administered alone as control. ODQ was locally administered (4 μg i. art.) 30 min before HCA (1 mg/kg i.v.) to evaluate the involvement of the L-arginine:NO:cGMP pathway. Animals were euthanized 6 hours or 14 days after arthritis induction, and the articular fluid was collected for leukocyte counts and measurement of cytokines. The statistical differences were determined by one-way or two-way analysis of variance (ANOVA) followed by Bonferroni test. P <0.05 was considered significant. Zymosan caused significant leukocyte influx both at the 6th hour and 14th day after injection, as compared to saline (46693 ± 8126 and 650 ± 143 cells vs 362 ± 53 and 15 ± 3 cells, respectively). Increased levels of cytokines [IL-1β (45-fold), IL-6 (23-fold), TNF-α (4-fold), IL-5 (2.5-fold), IL-4 (4-fold); IL-13 (7-fold)] and growth factors [VEGF (8-fold), GM-CSF (7-fold), M-CSF (4-fold), MCP-1 (3-fold)] were detected into the articular fluid from the zymosan group, as compared to saline. The treatment with HCA (1 mg/kg i.v.), two hours after arthritis induction, significantly reduced the hypernociception (36.10 ± 2.74 vs 18.90 g ± 1.84 g) and the acute leukocyte influx (14558 ± 4002 vs. 46900 ± 6831 cells). Results of the same
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magnitude were achieved with a higher dose of HCA (3 mg/kg i.v.), even when administered 5.5 h after zymosan. Pre-incubation with GalNAc partially reversed the HCA effects (hypernociception: 37.36 ± 5.45 g; influx: 8869 ± 4552 cells). ODQ could also reverse the antinociception elicited by HCA (21.02 ±3 .11). In face of these results, it was shown that HCA can be an important tool for the study of arthritis in animal models.
BRINGEL, PEDRO HENRIQUE DE SOUZA FERREIRA. ARTRITE INDUZIDA POR ZYMOSAN NA ARTICULAÇÃO TÍBIO-TARSAL DE
RATOS – AVALIAÇÃO DOS EFEITOS ANTI-INFLAMATÓRIOS DA LECTINA DE Hypnea cervicornis. 2015. 64 f. Dissertação (Mestrado Acadêmico ou Profissional em 2015) - Universidade Estadual do Ceará, , 2015. Disponível em: Acesso em: 24 de abril de 2024
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