PROTOCOLS TOIMPROVE OOCYTE COMPETENCE TO SUPPORT GOAT CLONING BY NUCLEAR TRANSFER USING TRANSGENIC SOMATIC CELLS
Autor(es):
CALDERÓN, CARLOS ENRIQUE MÉNDEZ
Palavras Chaves:
Não informado
Ano de Publicação:
2017
Resumo:
RESUMO
Este estudo visou buscar uma maior eficiência no desenvolvimento in vivo de embriões produzidos pela clonagem por TNCS, comparando sistematicamente protocolos hormonais para a melhoria da competência oocitária. Distintos protocolos hormonais foram utilizados para a obtenção de complexos cumulus-oócito (CCOs) maturados in vivo ou coletados imaturos para maturação in vitro, variando-se doses de FSH, exposição hormonal por inserto de progesterona (P4) e momento da recuperação dos CCOs, subclassificando as estratégias em três protocolos: Convencional, Dia Zero, e Coasting. No Experimento I, compararam-se os protocolos Convencionalvs. Dia Zero, com doses altas de FSH para a obtenção de CCOs maturados in vivo (180 mg) ou para maturação in vitro (162 mg). No Experimento II, compararam-se os protocolos Convencionalvs. Dia Zero, com doses mais baixas de FSH para a obtenção de CCOs maturados in vivo (Convencional, 132 mg) ou para maturação in vitro (Convencional ou Dia Zero, 80 mg). No Experimento III, compararam-se os protocolos Convencionalvs.Coasting, com doses menores de FSH para a obtenção de CCOs imaturos para maturação in vitro (100 mg). No Experimento I, os grupos Convencionalin vivo e in vitro e o Dia Zero in vitro foram semelhantes em produzir oócitos maturados, com o grupo Dia Zero resultando em maior taxa de ovulações, menor número de oócitos maturados e menor taxa de maturação. O protocolo Dia Zero se mostrou inferior ao Convencional, e a recuperação de CCOs maturos também foi menor do que os imaturos, entretanto resultando em maior eficiência para uso na clonagem. Houve o nascimento de uma fêmea clonada a partir de oócitos maturados in vivo pelo protocolo Convencional, com todas as demais prenhezes perdidas no curso da gestação. No Experimento II,todos os grupos foram semelhantes em produzir oócitos maturados, com o grupo Convencional in vivo resultando em maior taxa de ovulações, reduzindo o número de CCOs maturados. As doses menores de FSH neste experimento não comprometeram a resposta ovariana e a obtenção de
oócitos, quantitativamente, mas proporcionaram oócitos de menor qualidade. O protocolo para a coleta de oócitos maturados se mostrou inferior ao de imaturos quanto ao número médio de CCOs maturados, com todas as prenhezes perdidas. NoExperimento III foi testada uma variação do protocolo Convencional (Coasting) com a LOPU de oócitos imaturos após 20 h da última dose de FSH (total 100mg). O protocolo Coasting melhorou a qualidade dos oócitos e a taxa de maturação in vitro, com taxas de prenhez satisfatórias e o nascimento de dois machos após a clonagem por TNCS, em contraste a um caprino oriundo do protocolo Convencional. Em resumo, houve uma evolução favorável na aplicação sistemática de distintos protocolos variando o tempo de exposição à progesterona, a dose de FSH e o momento da coleta de CCOs caprinos imaturos. A queda do FSH circulante, através da utilização do protocolo Coasting poderá permitir uma melhor preparação dos oócitos visando uma maior competência oocitária para uso na clonagem.
This study aimed to improve the efficiency in the in vivo development of embryos produced by cloningby SCNT, systematically comparing hormonal protocols to improve oocyte compe-tence. Different hormonal protocols were used to obtain cumulus-oocyte complexes (COCs) matured in vivo or collected immature for in vitro maturation, varying doses of FSH, hormo-nal exposure by progesterone insert (P4) and time of recovery of COCs, subclassifying the strategies into three protocols: Conventional, Day Zero, and Coasting. In Experiment I, the Conventional vs. Day Zero protocols were compared, with high doses of FSH to obtain in vivo (180 mg) or in vitro (162 mg) matured COCs. In Experiment II, the Conventional vs. Day Zero protocols were compared, with lower doses of FSH to obtain in vivo (Conventional, 132 mg) or in vitro (Conventional or Day Zero, 80 mg) matured COCs. In Experiment III, we compared Conventional vs. Coasting protocols with lower doses of FSH to obtain immature COCs for in vitro maturation (100 mg). In Experiment I, Conventional in vivo and in vitro and Day Zero in vitro groups were similar in producing matured oocytes, with the Day Zero group resulting in a higher rate of ovulation, a lower number of mature oocytes and a lower matura-tion rate. Day Zero protocol was inferior when compared to Conventional, and the recovery of mature COCs was also lower than the immature ones, however, resulting in greater efficiency for use in cloning. A birth of a cloned female was obtained from in vivo-matured oocytes by the Conventional protocol, with all other pregnancies lost during the course of gestation. In Experiment II, all groups were similar in producing matured oocytes, with the Conventional in vivo group resulting in a higher rate of ovulation, thus reducing the number of mature COCs. The lower FSH doses in this experiment did not compromise ovarian response and oocyte recovery, quantitatively, but provided lower quality oocytes. The protocol for collec-tion of mature oocytes was inferior to immature counterparts in relation to the average num-ber of COCs matured and all pregnancies were lost. In Experiment III a var-
iation of the Conventional protocol (Coasting) with the LOPU of immature oocytes was test-ed after 20 h of the last dose of FSH (total 100mg). The Coasting protocol improved oocyte quality and in vitro maturation rate, with satisfactory pregnancy rates and the birth of two males after cloning, in contrast to a goat from the Conventional protocol. In summary, there was a favorable evolution in the systematic application of different protocols varying the time of exposure to progesterone, FSH dose and the time of collection of goat immature COCs. The decrease of circulating FSH through the use of Coasting protocol may allow a better preparation of oocytes aiming at improved oocyte competence for use in cloning.
CALDERÓN, CARLOS ENRIQUE MÉNDEZ. PROTOCOLS TOIMPROVE OOCYTE COMPETENCE TO SUPPORT GOAT CLONING BY NUCLEAR TRANSFER USING TRANSGENIC SOMATIC CELLS. 2017. 102 f. Tese (Doutorado em 2017) - Universidade Estadual do Ceará, , 2017. Disponível em: Acesso em: 10 de maio de 2024
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