Os espermatozoides epididimários de gatos domésticos podem ser refrigerados e utilizados em programas de reprodução assistida. Entretanto, os protocolos de refrigeração, adição de diluidores e protetores de membrana celular ainda não foram completamente estabelecidos. Dessa forma, os objetivos deste estudo foram: 1) comparar a qualidade de espermatozoides recuperados a fresco e após refrigeração a 4 ºC do epidídimo de gatos domésticos, utilizando os diluidores ACP-117c e Tris; 2) avaliar a qualidade de espermatozoides epididimários felinos utilizando os diluidores ACP-117c ou Tris adicionados de gema de ovo e refrigerados a 4 ºC/24h. Para o objetivo 1, 60 epidídimos foram distribuídos em 6 grupos: 10 epidídimos recuperados a fresco com o Tris (T0h), 10 refrigerados a 4 °C/2h e recuperados com Tris (T2h), 10 refrigerados a 4 °C/4h e recuperados com Tris (T4h), 10 epidídimos recuperados a fresco com o ACP-117c (A0h), 10 refrigerados a 4 °C/2h e recuperados com ACP-117c (A2h), 10 refrigerados a 4 °C/4h e recuperados com ACP-117c (A4h). Foram obtidos os complexos testículo-epidídimo (CTE) esquerdo e direito. Após refrigeração, as células foram recuperadas pela técnica de flutuação modificada. Em seguida, os espermatozoides foram avaliados em um sistema computadorizado (CASA) quanto aos parâmetros cinéticos, e subjetivamente acerca do vigor, viabilidade, concentração, funcionalidade de membrana e morfologia. Para o objetivo 2, foram utilizados 8 epidídimos. Os CTE foram refrigerados a 4 °C durante 2h. Em seguida, os espermatozoides foram recuperados com ACP-117c ou Tris e avaliados quanto à motilidade subjetiva e ao vigor. Após avaliação, 80μl da diluição foram adicionados de 20μl de gema de ovo e os espermatozoides foram reavaliados. Em seguida, uma alíquota foi refrigerada a 4 ºC/24h e reavaliada. Na primeira etapa (objetivo 1), ao avaliar o efeito do processo de refrigeração sobre os espermatozoides, a motilidade progressiva com ACP-117c declinou após 2h de refrigeração e não diferiu entre o grupo a fresco e após refrigeração por 4h. Vigor e integridade funcional da membrana foram superiores no grupo A4h em comparação ao A0h. O vigor espermático em T2h e T4h reduziu em comparação com T0h. Ao se avaliar o efeito do diluidor, T0h foi superior ao A0h quanto ao vigor e integridade funcional da membrana, entretanto, após 4h de refrigeração, o ACP-117c apresentou um maior percentual de células vivas. Na segunda etapa (objetivo 2), a motilidade total e o vigor espermático com o ACP-117c foram inferiores no grupo refrigerado por 24h em comparação ao grupo fresco. Também declinaram no grupo refrigerado com o Tris por 24h em comparação aos outros grupos. A motilidade com Tris foi superior a com ACP-117c após 24h de refrigeração. Conclui-se que os espermatozoides epididimários de gatos mantêm a qualidade necessária para utilização após serem refrigerados. O ACP-117c possibilitou um maior percentual de células vivas após refrigeração por 4 h, porém, o Tris continua sendo o diluidor de eleição para recuperação de espermatozoides a fresco. O ACP-117c adicionado de gema de ovo pode ser utilizado com sucesso para recuperação de células espermáticas, entretanto, após refrigeração por 24h, a qualidade dessas células reduz consideravelmente. Palavras chave: Espermatozoide epididimário. Refrigeração. Gema de ovo. Água de coco em pó. Gato doméstico.

The epididymal sperm of domestic cats can be refrigerated and used in assisted reproduction programs. However, cooling protocols, extenders addition and cell membrane protectors have not been fully established. Thus, the objectives of this study were: 1) to compare the quality of fresh sperm and sperm cooled at 4 ºC that had been recovered from the epididymides of domestic cats using ACP-117c and Tris extenders; 2) to evaluate the quality of feline epididymal sperm using the ACP-117c or Tris extenders added by egg yolk and cooled at 4 °C/24h. For the objective 1, 60 epididymides were divided into 6 groups: 10 fresh epididymides were recovered using Tris (T0h); 10 were kept at 4 °C/2h and recovered using Tris (T2h); 10 were kept at 4 °C/4h and recovered using Tris (T4h); 10 fresh were recovered using ACP-117c (A0h); 10 were kept at 4 °C/2h and recovered using ACP-117c (A2h), and 10 were kept at 4 °C/4h and recovered using ACP-117c (A4h). The left and right testis-epididymis complexes (TEC) were obtained. After cooling, the cells were recovered by the modified flotation technique. Then, the sperm kinetic parameters were evaluated in a computerized system (CASA), and the vigor, viability, concentration, membrane function and morphology of the sperm were subjectively assessed. For the objective 2, 8 epididymides were used. The TEC were cooled at 4 °C/2h. Then the spermatozoa were recovered with ACP-117c or Tris and evaluated for motility and vigor. Subsequently, 80μl of the dilution were added 20μl of egg yolk and the cells were reassessed. Soon after, an aliquot was stored in a refrigerator at 4 °C/24 hours and then reassessed. In the first stage (aim 1), to evaluate the effect of chilling process on spermatozoa, the progressive motility with ACP-117c declined after 2h of cooling, but did not differ between the fresh and 4h. The vigor and membrane function were higher in A4h than A0h. The vigor at T2h and T4h were decreased compared to T0h. When evaluating the effect of extender, T0h was higher than A0h for vigor and sperm membrane functional. However, after 4h of cooling, ACP-117c maintained a higher percentage of living cells. In the second stage (aim 2), the total motility and sperm vigor using the ACP-117c extender were significantly lower in the group refrigerated for 24h when compared to the fresh group. The motility and vigor declined in the refrigerated group with Tris for 24h as compared to other groups. The motility with Tris was higher than the motility with ACP-117c after 24h of cooling. It was concluded that feline epididymal sperm maintain the quality required for use after cooling. ACP-117c allowed a higher percentage of living cells recovery after cooling for 4 h, however, Tris remains the extender of choice for fresh sperm recovery. ACP-117c added by egg yolk can be successfully used for sperm cells recovery, however, after cooling for 24 hours, the quality of these cells decreases considerably. Keywords: Epididymal spermatozoa. Cooling. Egg yolk. Powdered coconut water. Domestic cat.