RESUMO
Os objetivos da presente tese foram: 1) Determinar o efeito da temperatura de transporte (4 vs
33 ºC) sobre a morfologia, crescimento folicular, viabilidade, maturação oocitária, e produção
de espécies reativas de oxigênio (ROS) de folículos pré-antrais e antrais iniciais caprinos
isolados e cultivados por 18 dias (Fase I); 2) Avaliar as taxas de sobrevivência e ativação de
folículos primordiais caprinos após 7 dias de cultivo in vitro em um sistema tridimensional na
ausência (folículos primordiais isolados inclusos em Alginato - 0,8%) ou na presença de
tecido ovariano (Fase II); 3) Avaliar as taxas de sobrevivência, ativação e crescimento
folicular após 7 dias de cultivo in vitro de fragmentos ovarianos babuínos (Fase III) inclusos
em diferentes matrizes (Alginato - 1% ou polyethyleneglycol-vinyl sulfone (PEG-VS) - 5%);
4) Investigar o efeito de diferentes concentrações de Cilostamida (10 e 20 µM) e tempos de
exposição (6 e 12 horas) durante a MIV de oócitos bovinos e caprinos (Fase IV). Na Fase I, os
ovários caprinos foram transportados individualmente em MEM-HEPES a 4 ou 33 °C.
Posteriormente, os folículos foram cultivados in vitro por 18 dias e os complexos cumulusoócito (CCO) maturados por 32 horas. Na Fase II, os folículos primordiais caprinos inclusos
em Alginato (10 folículos/gota), ou envoltos em tecido ovariano (in situ) encapsulado ou não
em Alginato, foram cultivados por 7 dias. Na Fase III, os folículos babuínos previamente
criopreservados foram cultivados por 10 dias incluso em tecido ovariano (in situ), na presença
ou ausência de matrizes extracelulares (PEG-VS vs Alginato) e de FSH. Por fim, na Fase IV,
CCOs caprinos e bovinos foram cultivados por 30 horas, iniciando com a adição da
Cilostamida (10 ou 20 µM) e/ou parede folicular por 6 ou 12 horas durante a pré-maturação in
vitro (PMIV) antes da MIV (24 ou 18h). O melhor resultado para produção de oócitos
totalmente crescidos e retomada meiótica foi obtido utilizando baixa (4 °C) para folículos préantrais e alta (33 °C) para folículos antrais iniciais (Fase I). Folículos primordiais caprinos
isolados e encapsulados em Alginato apresentaram maiores percentuais de ativação folicular
quando comparado aos demais tratamentos (Fase II). Na Fase III, a adição de FSH ao meio de
cultivo no tratamento com matrizes (PEG-VS e Alginato) promoveu uma melhora na
sobrevivência dos folículos pré-antrais babuínos inclusos em tecido ovariano após 10 dias
cultivo in vitro. Na Fase IV, a combinação da concentração/tempo de exposição à Cilostamida
durante a PMIV retardou a progressão meiótica apenas na espécie bovina após 6 e 12 horas de
cultivo. Como conclusão, a temperatura de transporte afetou diferencialmente o
desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais e folículos antrais iniciais caprinos (Fase I);
cultivo de folículos primordiais caprinos isolados e inclusos em Alginato permitiu uma
melhor taxa de ativação folicular (Fase II). Em babuínos, utilização de matrizes extracelulares
na presença de FSH melhorou a sobrevivência folicular após 10 dias de cultivo in vitro (Fase
III). Por fim, na Fase IV, a Cilostamida retardou de forma concentração dependente a
retomada da meiose somente na espécie bovina.
Palavras-chave: Temperatura de transporte. Matriz extracelular. Pré-maturação in vitro.
Ruminantes. Babuíno.
