EXPRESSÕES DE TLR-2, FOXP3 E COX-2 NA MEMBRANA SINOVIAL E CARACTERÍSTICAS DO LÍQUIDO ARTICULAR EM CÃES NATURALMENTE INFECTADOS POR Leishmania infantum
Autor(es):
FILHO, FLÁVIO CAROLINO DE SOUZA
Palavras Chaves:
Não informado
Ano de Publicação:
2017
Resumo:
RESUMO
Em cães, as artropatias são pouco frequentes e podem ser de origem infecciosa ou imunomediada. Na leishmaniose visceral canina (LVC) o comprometimento articular tem sido relatado associado a diminuição da atividade física. Objetivou-se analisar os aspectos físicos, bioquímicos e celulares do líquido sinovial (LS), e avaliar as expressões de TLR-2, FOXP3 e COX-2 na membrana sinovial de cães naturalmente infectados por Leishmania infantum. Cães (N=30) foram divididos em dois grupos: controle (GC; n=10) e infectados por L.infantum (GNIL; n=20) que foram avaliados quanto aos critérios clínicos ortopédicos. O LS foi analisado quanto ao volume, aspecto, viscosidade, células nucleadas totais, neutróifilos, concentração total de proteínas e reatividade sorológica do fator reumatóide (FR). Na segunda etapa do estudo, GNIL (N=20) foi subdividido em três grupos de acordo com a concentração de proteínas toais do LS, grupo I: 2 a 2,5 g/dL (valor de referência normal); Grupo Normal (GN); grupo II: 2,5 a 6,0 g/dL, Grupo Moderado (GM) e grupo III: > 6g/dL, Gurpo Elevado (GE). Amostras de membrana sinovial foram coletadas da região da articulação do joelho, foram processadas por histologia de rotina e marcadas por imuno-histoquímica com anticorpos monoclonais anti TLR2, FOXP3 e COX2 e foram descritas como nenhuma, leve, moderada e intensa marcação. Todo o protocolo experimental foi submetido ao Comitê de Ética em Uso de Animais (CEUA) da Universidade Estadual do Ceará (UECE) sob protocolo nº O volume médio de líquido sinovial do GC foi de 0,17±0,09 mL e do GNIL foi de 0,45±0,12 mL (P < 0,0001), concentração de proteínas totais do GC foi de 2,32±0,2 g/dL e do GNIL 5,83±2,0 g/dL (P < 0,0001). Em relação a CNT, observou-se no GC 72±12 células/mm³, enquanto no GNIL de 5.845±4.478 células/mm³ (P > 0,001). A média da contagem de neutrófilos no GC foi de 5±1células/mm³ e no GNIL 978±136 células/mm³. Foram visualizadas formas amastigotas de L. infantum no interior de macrófagos em 60% das amostras de LS, bem como extracelular. Foram reativos para FR, 75% dos animais. Na membrana sinovial houve um aumento da expressão dos marcadores TLR2 e COX2 em GIII (GE) quando comparado aos grupos GII (GM) e GI (GN). Em relação a expressão de FOXP3, houve uma moderada marcação em GN, e apenas uma levc marcação em GM e GE. Neste trabalho, pode-se concluir que a poliartrite apresentada nos cães pode estar associada a LVC e que a Proteína do Líquido sinovial reflete as alterações nas expressões de TLR2, FOXP3 e COX2 na membrana sinovial e sugerem uma interação entre LPG da L.infantum e TLR-2 modulando o processo inflamatório. Palavras-chave: Leishmaniose visceral canina. Artrite. Líquido sinovial. Fator reumatoide. Imuno-histoquímica.
Abstract:
ABSTRACT
Canine visceral leishmaniasis (CVL) in up to 30% of affected dogs causes muscle atrophy, a decrease in physical activity often associated with arthritis. The objective was to analyze the physical, biochemical and cellular aspects of synovial fluid (LS), and evaluate the expression of TLR-2, FOXP3 and COX-2 in the synovial membrane of dogs naturally infected with Leishmania infantum. Dogs (N = 30) were divided into two groups: control (GC; n = 10) and L.infantum (GNIL; n = 20) infected with clinical orthopedic criteria. LS was analyzed for volume, appearance, viscosity, total nucleated cells, neutrophils, total protein concentration and rheumatoid factor (RF) serological reactivity. In the second part of the study dogs (N = 20) were divided into three groups: GI, GII and GII, according to the increasing concentration of total proteins of the synovial fluid (LS). Synovial membrane samples were collected from the knee joint region, were processed by routine histology and labeled by immunohistochemistry with monoclonal antibodies anti TLR2, FOXP3 and COX2 and were described as no, mild, moderate and intense marking. The entire experimental protocol was submitted to the Committee on Ethics in Animal Use (CEUA) of the State University of Ceará (UECE) under protocol # The mean synovial fluid volume of the GC was 0.17 ± 0.09 mL and the GNIL was of 0.45 ± 0.12 mL (P <0.0001), total GC protein concentration was 2.32 ± 0.2 g / dL and GNIL 5.83 ± 2.0 g/dL (P <0.0001). Regarding CNT, 72 ± 12 cells / mm³ was observed in the GC, whereas in the GNIL it was 5,845 ± 4,478 cells / mm³ (P> 0.001). The mean neutrophil count in the GC was 5 ± 1 cells / mm 3 and in the GNIL 978±136 cells / mm 3. Amastigote forms of leishmania infantum were visualized within macrophages in 60% of the LS as well as extracellular samples. 75% of the animals were RF reactive. In the synovial membrane there was an increase in the expression of the TLR2 and COX2 markers in GIII when compared to the GII and GI groups; however, in relation to the expression of FOXP3, there was a moderate GI marking, and only a low marking in GII and GIII. This work suggests that LVC may be the source of polyarthritis in dogs. Possibly CVL is modifying the expression of TLR2, FOP3 and COX2 in the synovial membrane of dogs naturally infected by L.infantum, with a possible interaction between L.infantum LPG and TLR2 membrane protein.
FILHO, FLÁVIO CAROLINO DE SOUZA. EXPRESSÕES DE TLR-2, FOXP3 E COX-2 NA MEMBRANA SINOVIAL E CARACTERÍSTICAS DO LÍQUIDO ARTICULAR EM CÃES NATURALMENTE INFECTADOS POR Leishmania infantum. 2017. 75 f. Dissertação (Mestrado Acadêmico ou Profissional em 2017) - Universidade Estadual do Ceará, , 2017. Disponível em: Acesso em: 7 de maio de 2024
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