CONSERVAÇÃO DE ESPERMATOZÓIDES RECUPERADOS DA CAUDA DO EPIDÍDIMO DE CÃES
Autor(es):
FILHO, ANTONIO CAVALCANTE MOTA
Palavras Chaves:
Não informado
Ano de Publicação:
2014
Resumo:
O objetivo da presente tese foi avaliar a viabilidade dos espermatozoides recuperados da cauda do epidídimo, usando dois diferentes diluidores. Foram utilizados animais oriundos do Centro de Controle de Zoonozes de Fortaleza. O trabalho foi dividido em dois experimentos. Experimento 1: avaliação da qualidade dos espermatozoides epididimários, após o complexo-testículo epidídimo terem sido armazenados in situ a 4 °C por 6, 12 e 18 h. Experimento 2: avaliação da qualidade dos espermatozoides epididimários congelados após terem sido conservados in situ a 4 °C por 12h. No experimento 1: Foram utilizados 60 cães machos adultos, com peso de 10-20 kg. Para a refrigeração e recuperação dos espermatozoides epididimários, 60 pares do CTE foram divididos em 4 grupos, de acordo com o tempo de refrigeração do CTE e posterior recuperação espermática: G0h, G6h, G12h e G18h, em que cada par do CTE permaneceu por zero, seis, doze ou dezoito horas a 4°C. A recuperação dos espermatozoides da cauda do epidídimo foi realizada pela técnica de flutuação utilizando-se o diluidor ACP-106c ou Tris. Avaliou-se a morfologia, funcionalidade e motilidade espermática total e progressiva, além de parâmetros obtidos pelo CASA. Os dados foram submetidos à ANOVA seguido do teste de Turkey (P < 0,05). Em todos os parâmetros avaliados, não houve diferença entre os diluidores testados (P>0,05). Os valores de motilidade total nos grupos G0h, G6h, G12h, e G18h para o ACP-106c foram 84,4±7,7; 81,6±11,6; 88,3±6,5 e 69,5±16,9, respectivamente, e para o Tris 85,2±8,7; 77,4±14,3; 79,0±17,8 e 65,4±17,9, respectivamente. No experimento 2: Foram utilizados 60 cães machos adultos, com peso de 10-20 kg. Removeu-se o complexo testículo-epidídimo (CTE) que foi imerso em solução fisiológica 0,9% e transportado em caixa térmica ao laboratório. Os 60 CTE foram divididos em 4 grupos de acordo com o tempo de refrigeração (0h ou 12h) a 4°C e de acordo com o diluidor (ACP-106c ou TRIS) empregado para a recuperação espermática, constituindo os 4 grupos experimentais: (G0h-ACP, G12h-ACP, G0h-TRIS e G12h-TRIS). A recuperação dos espermatozoides da cauda do epidídimo foi realizada pela técnica de fluxo retrogrado. Em seguida, o material obtido foi centrifugado a 800g/5 minutos para remoção dos resíduos celulares e submetidos à criopreservação. Para cada epidídimo foi adicionado 1,0 mL de um dos dois diluidores, pré-aquecidos a 37°C por 5 minutos, uma semana após foram descongelados a 37°C/1 min e submetidos à avaliação de morfologia, funcionalidade e motilidade espermática total e progressiva, além de parâmetros obtidos pelo CASA. Os dados foram submetidos à MANOVA (P < 0,05). Os valores de motilidade total nos grupos G0h e G12h, para o ACP-106c foram, 52,17 ± 1,78; 49,8 ± 1,93 e Tris 50,7 ± 2,06 e 43,90 ± 2,51, respectivamente. Conclui-se que o ACP-106c pode ser utilizado para recuperar os espermatozoides epididimários refrigerados e podem ser viáveis por até 12h de refrigeração. O diluidor ACP-106c, pode ser utilizado para criopreservação de espermatozoides epididimários caninos, devendo realizar o procedimento de congelação, imediatamente após recuperação espermática.
Palavras-chave: Epidídimo. Espermatozoide. Cão.
Abstract:
The aim of this thesis was to evaluate the viability of spermatozoa recovered from the cauda epididymis, using two different extenders. Animals from the Control Center Zoonozes Fortaleza were used. The work was divided into two experiments. Experiment 1: assessment of the quality of epididymal sperm after epididymal-testicular complex in situ were stored at 4 ° C for 6, 12 and 18 h. Experiment 2: evaluation of the quality of frozen epididymal sperm after being preserved in situ at 4 ° C for 12h. In experiment 1: 60 adult male dogs were used, weighing 10-20 kg. For cooling and recovery of epididymal spermatozoa, 60 pairs of CTE were divided into 4 groups according to the time of cooling CTE and subsequent sperm recovery: G0h, G6H, G12H and G18h, where each pair of CTE remained for zero , six, twelve or eighteen hours at 4 ° C. The recovery of sperm tail of the epididymis was performed by floating using the ACP-Tris extender or 106c. We evaluated the morphology, functionality and total and progressive motility, and parameters obtained by CASA. Data were analyzed by ANOVA followed by Tukey's test (P <0.05). In all treatments, there was no difference between the tested extenders (P> 0.05). The values of total motility in groups G0h, G6H, G12H, and G18h for ACP-106c were 84.4 ± 7.7; 81.6 ± 11.6; 88.3 ± 6.5 and 69.5 ± 16.9, respectively, and 85.2 ± 8.7 Tris; 77.4 ± 14.3; 79.0 ± 17.8 and 65.4 ± 17.9, respectively. In experiment 2: 60 adult male dogs were used, weighing 10-20 kg. Removal of the testes, epididymis complex (CTE) which was immersed in 0.9% saline and transported to the laboratory in a thermal box. 60 CTE were divided into 4 groups according to a cooling time (0h and 12h) at 4 ° C and in accordance with thinner (ACP-106c or TRIS) used for sperm recovery, forming the 4 experimental groups: (G0h-ACP, ACP-G12H, G12H and G0h-TRIS-TRIS). The recovery of sperm from the cauda epididymis was performed using the technique of retrograde flow. Then, the material was centrifuged at 800g / 5 minutes to remove cell waste and subjected to cryopreservation. For each epididymis was added 1.0 ml of one of the two extenders, preheated to 37 ° C for 5 minutes, were thawed one week at 37 ° C / 1 min and examined for morphology, motility and full functionality and progressive, and parameters obtained by CASA. The data were subjected to MANOVA (P <0.05). The values of total motility in groups G0h and G12H, for the ACP-106c were 52.17 ± 1.78; 49.8 ± 1.93 and 50.7 ± 2.06 Tris and 43.90 ± 2.51, respectively. It is concluded that the ACP-106c can be used to recover the chilled epididymal spermatozoa and may be viable for up to 12 hours of cooling. The ACP-106c, thinner can be used for cryopreservation of canine epididymal sperm, and must perform the procedure for freezing sperm immediately after recovery.
Keywords: Epididymis. Sperm. Dog.
Tipo do Trabalho:
Tese
Referência:
FILHO, ANTONIO CAVALCANTE MOTA. CONSERVAÇÃO DE ESPERMATOZÓIDES RECUPERADOS DA CAUDA DO EPIDÍDIMO DE CÃES. 2014. 75 f. Tese (Doutorado em 2014) - Universidade Estadual do Ceará, , 2014. Disponível em: Acesso em: 7 de maio de 2024
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