Avaliação da atividade anti-Leishmania do extrato hidroalcoólico e frações de Tephrosia cinerea (L.) Pers
Autor(es):
Bezerra, Jeamile Lima
Palavras Chaves:
Não informado
Ano de Publicação:
2012
Resumo:
O gênero Tephrosia (Fabaceae), com cerca de 300 espécies, é amplamente distribuído nas regiões tropicais e subtropicais, sendo trinta espécies nativas da América do Sul. Já foram descritas para o gênero atividades inseticida, pesticida, anti-helmíntica, anticancerígena, antiulcerogênica e anti-Leishmania. Tephrosia cinerea (L.) Pers, conhecida popularmente como anil bravo, é um arbusto utilizado empiricamente no tratamento de infecções, inflamações, úlceras, afecções nervosas e diarréias. O objetivo deste estudo foi avaliar o extrato hidroalcoólico de Tephrosia cinerea quanto à atividade leishmanicida, em ensaios in vivo e in vitro, analisando também a resposta inflamatória e a toxicidade aguda e crônica. Extrato de folhas (EHT), vagem, flores e raízes foram obtidos por maceração com etanol 70% e testados contra promastigotas de Leishmania amazonensis. Realizou-se fracionamento biomonitorado do EHT através de técnicas de partição líquido-líquido e cromatografia em coluna de sílica gel, resultando no isolamento de uma fração flavanoídica que exibiu atividade expressiva com CI50 de 0.54, 3.36 e 4.96 µg/mL para L. amazonensis, Leishmania chagasi e Leishmania braziliensis, respectivamente. Tratamento in vitro com EHT (40 e 80 µg/mL) e a fração flavonoídica (5 µg/mL) reduziu em 65, 74,5 e 69%, respectivamente, a infecção de macrófagos por L. amazonensis. Em virtude da atividade expressiva, o ensaio in vivo foi conduzido utilizando camundongos C57Bl/6 infectados no coxim plantar esquerdo com 5x105 de L.amazonensis e no 45º dia iniciamos o tratamento por via intralesional com a fração flavonoídica (10mg/kg/dia) ou antimoniato de meglumina (28mg/kg/dia) ou solução tamponada com fosfato (PBS, controle negativo). Os resultados do tratamento mostram atividade leishmanicida in vivo de T. cinerea. Verificamos a redução significativa no tamanho das patas do grupo tratado com fração flavonoídica em relação ao controle, indicando regressão da lesão leishmaniótica. Dosagem sérica das citocinas IFN-γ, IL-4 e IL-10 mostrou elevação significativa na concentração de IFN-γ apenas no grupo tratado com a fração flavonoídica. A técnica de imunohistoquímica foi empregada para determinar a carga parasitária do baço e lesão de pata, através da contagem direta das amastigotas nesses tecidos. O resultado obtido revelou menor parasitemia no baço e lesão de pata de animais tratados com a fração flavonoídica em relação ao controle negativo, sendo que, em relação ao antimoniato de meglumina, observamos menor carga parasitária somente no baço. O efeito antiinflamatório de EHT foi evidenciado em modelos clássicos de inflamação. Tratamento com EHT na dose de 100mg/Kg inibiu o edema de pata, sendo esta inibição mais expressiva na 3ª hora. No modelo de peritonite por corpo estranho, o tratamento reduziu significativamente a contagem de neutrófilos. O tratamento diário com 10, 100 e 250 mg/kg de EHT reduziu significativamente o granuloma induzido por corpo estranho. A contagem diferencial do granuloma revelou aumento de macrófagos e diminuição dos neutrófilos, sugerindo uma modulação dainflamação. Em relação à avaliação toxicológica, não se observou morte e nem tampouco alterações macroscópicas ou microscópicas nos órgãos vitais nos animais tratados com T. cinerea, sugerindo segurança no uso da espécie. Após a análise dos resultados obtidos, foi proposta formulação farmacêutica contendo extrato e/ou frações ativas das folhas de Tephrosia cinerea e uso no tratamento da lesão leishmaniótica, permitindo o depósito de patente junto ao Instituto Nacional de Propriedade Intelectual, sob nº 080, em 18 de outubro de 2011.
Tephrosia genus (Fabaceae) has about 300 species and is distributed in tropical and subtropical regions, with about 30 species is native from South America. Some activities have been shown as antihelminthics, antitumoral, altiulcer and antileishmanial for species to Tephrosia. T. cinerea (L.) Pers., known as “anil bravo”, is used popularly in the treatment of infections, inflammations, ulcers and diarrhea. The aim of this study was to evaluate the hydroalcoholic extract of Tephrosia cinerea on the leishmanicidal activity in in vivo and in vitro, also analyzing the inflammatory response and acute and chronic toxicity. The extract of leaves (EHT), pods, flowers and roots were obtained by maceration and tested against promastigotes Leishmania amazonensis. There was bioassay-guided fractionation of EHT by liquid-liquid partitioning techniques and silica gel column chromatography, resulting the isolation of a flavonoidic fraction that presented 0.54, 3.36 and 4.96 µg/mL of inhibitory concentration for L. amazonensis, L. chagasi e L. braziliensis, respectively. In vitro treatment with EHT (40 and 80 mg / ml) and the flavonoidic fraction composition (5 mg / ml) decrease of 65, 74.5 and 69% respectively for macrophage infection by L. amazonensis. Due to expressive flavonoidic fraction activity, the in vivo study used C57BI/6 mice, infected in the left footpad with 5x105 of L. amazonensis and in the 45th day intralesional theraphy was started with a flavonoidic fraction (10mg/kg/day), meglumine antimoniate (28mg/kg/day) and PBS (negative control). We found a significant reduction in the size of the paw of the group treated with the flavonoidic fraction in relation to the control, indicating leishmanial lesion regression. Serum cytokine IFN-γ, IL-4 and IL-10 showed a significant increase in the concentration of IFN-γ only in the group treated with the flavonoidic fraction. The immunohistochemical technique was used to determine the parasite load of spleen and paw lesion, by direct counting of amastigotes in these tissues. The result showed lower parasitemia in the spleen and lesions paw of treated animals with the flavonoidic fraction composition compared to the negative control, and, in relation to the meglumine antimoniate, show lower parasitic load only in the spleen.The anti-inflammatory effect of EHT was found in models of inflammation. Treatment with EHT at dose of 100mg/kg inhibited paw edema, being more significant in the 3rd hour. In the model of peritonitis caused by foreign body, treatment significantly reduced the neutrophil count. Daily treatment with 10, 100 and 250 mg/kg induced significant reduction in the EHT induced foreign body granuloma. The differential count of granuloma showed an increase of decrease in macrophages and neutrophils, suggesting that the modulation of inflammation. In relation to the toxicological assessment, there was no death, neither macroscopic or microscopic changes in vital organs in animals treated with T. cinerea suggest the safe use of the species. From these results, patented pharmaceutical formulations obtained from leaves of Tephrosia cinerea with the aim of topical use in single or multiple manifested lesions in cutaneous leishmaniasis. After analysis of results, it was proposed pharmaceutical formulation containing extract and / or active fractions from the leaves of Tephrosia cinerea and use in the treatment of lesion leishmanial, allowing the deposit of a patent by INPI with the Nº 080 on 18, October 2011.
Bezerra, Jeamile Lima. Avaliação da atividade anti-Leishmania do extrato hidroalcoólico e frações de Tephrosia cinerea (L.) Pers. 2012. 143 f. Tese (Doutorado em 2012) - Universidade Estadual do Ceará, , 2012. Disponível em: Acesso em: 27 de abril de 2024
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