Influência da interação folicular, do fluido folicular e do fator de crescimento semelhante à insulina II (IGF-II) no desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais isolados caprinos
Autor(es):
Duarte, Ana Beatriz Graça
Palavras Chaves:
Não informado
Ano de Publicação:
2011
Resumo:
A presente tese foi realizada em três fases. A fase I teve por objetivo avaliar a interação
folicular pré-antral quando estes eram cultivados com 1 ou 3 folículos/gota na presença
ou ausência do hormônio folículo estimulante recombinante (rFSH 1000ng/ml) ou ainda,
co-cultivados com folículos antrais caprinos. Na fase II, foi verificada a influência do
momento da adição (Dias 0, 6 ou 12) de 10% de fluido oriundo de folículos dominantes
bovinos (bFF) no meio de cultivo de folículos pré-antrais caprinos e por fim, na fase III,
avaliou-se o efeito da suplementação de 20 ou 50 ng/ml do fator de crescimento
semelhante à insulina II (IGF-II) associado ou não ao FSHr sobre o desenvolvimento in
vitro de folículos pré-antrais isolados caprinos. Em todas as fases, os folículos
secundários foram isolados mecanicamente por microdissecção e cultivados por 18 dias
em sistema de microgotas de αMEM+
, a 39oC e 5% de CO2 em ar. Durante o cultivo, os
folículos foram avaliados quanto à morfologia, formação de antro e taxa de crescimento.
Após o cultivo, os oócitos foram removidos dos respectivos folículos, submetidos à
maturação in vitro (MIV) e avaliados quanto à viabilidade com marcadores fluorescentes.
Os resultados da fase I demonstraram que o cultivo em grupo de folículos pré-antrais, na
ausência de rFSH, favoreceu a sobrevivência, promoveu o crescimento e aumentou a taxa
formação de antro em relação ao cultivo individual (p<0,05). Na presença de rFSH, o
cultivo em grupo aumentou a taxa de oócitos recuperados para MIV e a retomada da
meiose (p<0,05). O co-cultivo de folículos pré-antrais com antrais iniciais apresentou um
efeito negativo na viabilidade, formação de antro e oócitos para MIV, entretanto, quando
em grupo, mesmo na presença de um folículo antral, os folículos pré-antrais não
apresentaram inibição do crescimento. Com relação à fase II, a adição do bFF no início
do cultivo (Dias 0 e 6) melhorou o desenvolvimento folicular in vitro e a retomada da
meiose (p<0.05). Finalmente na fase III, o IGF-II e/ou FSHr promoveram a manutenção
da morfologia folicular em relação ao αMEM+
. Contudo, o IGF-II sozinho (50 ng/ml) foi
mais efetivo na formação de antro precoce e vale salientar ainda, que sua associação
(IGF-II 20 ng/ml) com o FSHr resultou no incremento da taxa de retomada da meiose em
relação ao αMEM+
(p<0,05). Concluindo, os resultados obtidos nesta tese revelaram que a
interação folicular influencia positivamente o desenvolvimento in vitro de folículos préantrais caprinos, aumentando a produção de oócitos competentes para MIV. Além disso,
a interação de folículos pré-antrais com antrais iniciais inibe o desenvolvimento in vitro
de folículos pré-antrais, contudo, essa influência depende do número de folículos cocultivados. Além disso, o bFF oriundo de folículos dominantes promove a viabilidade e o
crescimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos quando adicionado no início do
cultivo. Finalmente, conclui-se ainda que, o IGF-II influencia na morfologia folicular e na
competência de oócitos crescidos in vitro a partir de folículos pré-antrais caprinos.
Palavras-chave: Ovário caprino, oócito, foliculogênese, co-cultivo, fluido folicular, IGFII.
Abstract:
This study was divided into three phases. The phase I was designed to evaluate the
interaction among preantral follicles cultured individually or in group (1 or 3
follicles/drop) in presence or absence of recombinant follicle stimulating hormone (rFSH
1000ng/ml) and moreover, cultured or not with antral follicles. The phase II investigated
the time of addition (Days 0, 6 or 12) of 10% follicular fluid from bovine dominant
follicles (bFF) on the in vitro culture of goat preantral follicles. Finally, on phase III, the
influence of 20 or 50 ng/ml of Insulin-like growth factor II (IGF-II) associated or not to
rFSH on the in vitro development of preantral follicles isolated from goats was evaluated.
For in vitro culture in all phases, the secondary follicles were mechanically isolated by
microdissection and cultured for 18 days in microdrops of αMEM+
, under mineral oil at
39oC and 5% CO2 in air. During the culture, the follicular morphology, antrum formation,
and growth rate were evaluated. After culture, the oocytes were removed from their
follicles, undergoing to in vitro maturation (IVM) and assessed for viability with
fluorescent markers. The results of phase I demonstrated that the group of preantral
follicles cultured without rFSH, maintained survival, promote growth and antrum
formation rate in relation to the individual culture. In the presence of rFSH the group
culture significantly increased the rate of oocytes for IVM and the resumption of meiosis
(p <0.05). The co-culture of preantral follicles with antral showed a negative effect on
survival, antrum formation and oocytes for IVM. However, when the group culture was
cultured with an antral follicle, there was no inhibition on in vitro growth. In phase II, the
addition of the bFF at the beginning of culture (Day 0 and 6) improved significantly (p
<0.05) the in vitro follicular development and the resumption of meiosis. Finally in phase
III, IGF-II and/or FSHr promoted the maintenance of follicular morphology in relation to
αMEM+
. However, IGF-II alone (50 ng/ml) was more effective in early antrum
formation, and the association of 20 ng/ml of IGF-II with FSHr increased the rate of
meiosis resumption in relation to αMEM+
(p <0.05). In conclusion, the results obtained in
this work showed that the interaction positively influences follicular development in vitro
of goat preantral follicles by increasing production of competent oocytes for IVM.
Furthermore, the interaction of primordial follicles to antral initial inhibits in vitro
development of preantral follicles, however, this influence depends on the number of
follicles co-cultured. Furthermore, the bFF derived follicle dominates promotes the
viability and in vitro growth of preantral goats when added at the beginning of culture.
Finally, IGF-II influences the morphology in vitro follicle and oocyte competence in vitro
of goat preantral follicles.
Keywords: Caprine ovary, oocyte, folliculogenesis, IGF-II, in vitro culture, co-culture,
follicular fluid.
Tipo do Trabalho:
Tese
Referência:
Duarte, Ana Beatriz Graça. Influência da interação folicular, do fluido folicular e do fator de crescimento semelhante à insulina II (IGF-II) no desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais isolados caprinos. 2011. 211 f. Tese (Doutorado em 2011) - Universidade Estadual do Ceará, , 2011. Disponível em: Acesso em: 29 de abril de 2024
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