Efeito do fator de crescimento do nervo (NGF), fator de crescimento de fibroblasto-10 (FGF-10) e insulina sobre o desenvolvimento in vitro folículos pré-antrais caprinos
Autor(es):
Chaves, Roberta Nogueira
Palavras Chaves:
Não informado
Ano de Publicação:
2011
Resumo:
Os objetivos deste estudo foram: 1) avaliar o efeito da adição de diferentes concentrações do
fator de crescimento do nervo (NGF), fator de crescimento de fibroblasto-10 (FGF-10) e
insulina na sobrevivência, ativação e crescimento in vitro de folículos pré-antrais caprinos
cultivados inclusos em fragmentos de tecido ovariano, e 2) investigar os efeitos da insulina
sozinha ou em combinação com o hormônio folículo estimulante (FSH) sobre a sobrevivência,
formação de antro, crescimento folicular e competência para a retomada da meiose de oócitos
oriundos de folículos secundários caprinos isolados e crescidos in vitro, bem como avaliar os
níveis de secreção de estradiol e RNAm para os receptores de FSH (FSHR), insulina (INSR) e
aromatase P450 (P-450AROM) em folículos caprinos cultivados in vitro através da técnica de
ensaio imunoenzimático e RT-PCR em tempo real, respectivamente. Para o cultivo in situ,
fragmentos de córtex ovariano foram cultivados in vitro por um ou sete dias em α-MEM
+
sozinho ou adicionado de diferentes concentrações de NGF e de FGF-10 (1, 10, 50, 100 ou 200
ng/mL), bem como de insulina (5, 10 ng/mL e 5, 10 µg/mL). Antes e após cultivo, os
fragmentos foram analisados por histologia, microscopia eletrônica de transmissão e
microscopia de fluorescência, e os folículos foram classificados de acordo com o estádio de
desenvolvimento (primordiais, transição, primários e secundários), bem como em normais ou
atrésicos. Além disso, os diâmetros oocitário e folicular também foram avaliados. Com relação
ao cultivo de folículos isolados, folículos secundários avançados foram microdissecados e
cultivados por 18 dias em α-MEM
+
suplementado com diferentes concentrações (5, 10 ng/mL e
10 µg/mL) de insulina contendo ou não FSH adicionado de maneira sequencial. Para os
experimentos in situ, os resultados mostraram que após sete dias de cultivo, 1 ng/mL de NGF
promoveu a manutenção da ultraestrutura folicular. A adição de 50 ng/mL de FGF-10 ao meio
manteve a viabilidade e promoveu o crescimento folicular in vitro. Além disso, a utilização de
10 ng/mL de insulina promoveu a sobrevivência, a ativação e o crescimento folicular e
oocitário. Após o cultivo dos folículos isolados, observou-se que 10 ng/mL de insulina em
combinação com FSH foi mais eficiente na promoção de retomada da meiose de oócitos
oriundos de folículos pré-antrais, além de manter a sobrevivência, estimular o crescimento
folicular e aumentar a expressão de RNAm para INSR e P-450AROM e a secreção de estradiol.
Em conclusão, os resultados deste estudo mostraram que a utilização de NGF (1 ng/mL), FGF10 (50 ng/mL) e insulina (10 ng/mL) promove a manutenção da sobrevivência folicular e/ou o
desenvolvimento dos folículos pré-antrais caprinos. Além disso, a associação de insulina e FSH
assegurou o crescimento de folículos secundários caprinos, aumentaram os níveis de RNAm
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para INSR e P-450AROM, bem como a secreção de estradiol em folículos ovarianos caprinos
cultivados.
Palavras-chave: NGF. FGF-10. Insulina. Oócito. Cabra
Abstract:
The objectives of this study were: 1) to evaluate the effect of adding of different concentrations
of nerve growth factor (NGF), fibroblastic growth factor-10 (FGF-10) and insulin on the
survival, activation and in vitro growth of caprine preantral follicles cultured enclosed in the
ovarian tissue fragments, and 2) to investigate the effects of insulin alone or in combination
with follicle stimulating hormone (FSH) on survival, antrum formation, follicular growth and
competence to resumption of meiosis in oocytes from secondary follicles isolated from goats in
vitro grown, as well as to assess the levels estradiol secretion and of mRNA for FSH receptor
(FSHR), insulin (INSR) and P450 aromatase (P-450AROM) in goat follicles in vitro culture by
enzymatic immunoassay and RT-PCR in real time, respectively. To the in situ culture,
fragments of ovarian cortex were cultured in vitro for one or seven days in MEM
+
alone or
supplemented with different concentrations of NGF and of FGF-10 (1, 10, 50, 100 or 200
ng/mL), as well as insulin (5, 10 ng/mL and 5, 10 µg/mL). Before and after culture, the
fragments were analyzed by histology, transmission electron microscopy and fluorescent
microscopy, and the follicles were classified according to their stage of development
(primordial, intermediate, primary and secondary), as well as normal or atretic. Moreover, the
oocyte and follicle diameters were also evaluated. With regard to isolated culture, advanced
secondary follicles were microdissected and cultured for 18 days in α-MEM
+
supplemented
with different concentrations (5, 10 ng/mL and 10 µg/mL) of insulin with or without FSH
added sequentially. To the in situ experiments, the results showed that after seven days of
culture, 1 ng/mL NGF promoted the maintenance of follicular ultrastructure. The addition of 50
ng/mL FGF-10 to the medium maintained the viability and promoted the growth in vitro.
Moreover, the use of 10 ng/mL insulin promoted the follicular survival, activation and follicular
and oocyte growth. After culture of isolated follicles, it was observed that 10 ng/mL of insulin
in combination with FSH was more efficient in promoting oocyte meiosis resumption from goat
preantral follicles, besides maintaining the survival, stimulate follicular development and
increase the expression of mRNA for INSR and P-450AROM and estradiol secretion. In
conclusion, our results showed that the use of NGF (1 ng/mL), FGF-10 (50 ng/mL) and insulin
(10 ng/mL) promote the maintenance of survival and/or development of goat preantral follicles.
Furthermore, the combination of insulin and FSH ensured the growth of goat secondary
follicles, increased levels for INSR and P-450AROM mRNA, as well as estradiol secretion in
goats ovarian follicles cultured.
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Keywords: NGF. FGF-10. Insulin. Oocyte. Goat
Tipo do Trabalho:
Tese
Referência:
Chaves, Roberta Nogueira. Efeito do fator de crescimento do nervo (NGF), fator de crescimento de fibroblasto-10 (FGF-10) e insulina sobre o desenvolvimento in vitro folículos pré-antrais caprinos. 2011. 392 f. Tese (Doutorado em 2011) - Universidade Estadual do Ceará, , 2011. Disponível em: Acesso em: 3 de maio de 2024
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