Caracterização molecular de lentivírus de pequenos ruminantes isolados no Brasil
Autor(es):
Feitosa, Aryana Lushese Vasconcelos Lima
Palavras Chaves:
Não informado
Ano de Publicação:
2011
Resumo:
Os Lentivírus de Pequenos Ruminantes incluem os Vírus da Artrite Encefalite Caprina (CAEV) e o Vírus Maedi-Visna (MVV), estes têm sido considerados geneticamente distintos, mas antigenicamente relacionados como patógenos de caprinos e ovinos, respectivamente. Além disso, foi demonstrado que estes vírus estão constantes e facilmente transgredindo a barreira entre caprinos e ovinos, com CAEV infectando ovinos e MVV infectando caprinos. Assim, como todos os lentivírus, o genoma do CAEV tem uma alta taxa de mutação e o seu grau de heterogeneidade pode estar relacionado com a baixa fidelidade da transcriptase reversa, que carece da atividade de leitura da enzima exonuclease (proof reading). A análise genética de Lentivírus de Pequenos Ruminantes (LVPRs) pode ajudar a compreender a genética, proteínas e antigenicidade destes vírus; sua patogênese, epidemiologia, relações filogenéticas e, assim, a sua inclusão nos subgrupos de LVPRs recentemente criados. Também pode ser relevante para o desenvolvimento de testes de diagnósticos específicos às estirpes locais. Neste sentido, os principais objetivos deste trabalho consistem em isolar cepas virais circulantes e analisar a filogenia por meio de sequências gag e pol; bem como, implementar uma biblioteca genômica de LVPRs isolados em alguns estados brasileiros. Para isso, inicialmente, amostras sanguíneas de caprinos e ovinos foram analisados utilizando a técnica de Imunodifusão em Gel de Agarose (IDGA), confirmados por Western Blotting com consequente isolamento dos vírus em Mem brana Sinovial Caprina (MSC) a partir de amostras positivas. Em seguida, foi realizada Reação em Cadeia da Polimerase (Nested-PCR) para confirmação da presença de vírus, assim como para a amplificação e sequenciamento das regiões de interesse. Também foram realizadas comparações através de alinhamentos entre as regiões gag e pol das cepas isoladas, além da montagem da biblioteca genômica de LVPRs isolados. Foram isoladas cepas virais circulantes de animais naturalmente infectados nos estados do Rio Grande do Norte, Ceará, Piauí, Bahia e Minas Gerais. A cepa isolada, denominada BrRN-CNPC.G1 foi considerada o primeiro isolamento do CAEV no Estado do Rio Grande do Norte. Todas as cepas isoladas mostraram-se ser fenotipicamente líticas, do tipo rápido/alto. Foram amplificadas e sequenciadas cepas virais isoladas do Ceará e Minas Gerais e Rio Grande do Norte, tanto para o gene gag quanto para o gene pol. Pela genealogia proposta com base nas sequências nucleotídicas dos genes gag e pol, a sua topologia mostrou-se compatível com os genótipos do subtipo B de CAEV. O alinhamento das sequências de aminoácidos da região gag indicaram divergências entre as linhagens deste estudo com a cepa padrão CAEV-Cork. Essa divergência de aminoácidos foi ainda mais acentuada quando comparas sequências de aminoácidos do gene pol. Palavras-chave: Lentivírus, Filogenia, gag, pol, CAEV, MVV.
Abstract:
CAEV and MVV have been considered genetically distinct but antigenically related as pathogens of goats and sheep, respectively. Moreover, it was demonstrated that these viruses are constantly and easily breaking the barrier between sheep and goats, sheep being infected with CAEV and MVV infecting goats. Like all lentiviruses, the genome of CAEV has a high mutation rate and degree of heterogeneity that may be related to the low fidelity of reverse transcriptase, which lacks proof reading activity of the exonuclease subunit. Genetic analysis of Small Ruminants Lentiviruses (SRLVs) may help to understand the genetics, the proteins and the antigenicity of these viruses, their pathogenesis, epidemiology, phylogenetic relationships and thus their inclusion in the newly created subgroups of SRLVs. It may also be relevant to the development of diagnostic tests specific to the local strains. In this sense, the aim of this work was to isolate circulating viral strains and to study the phylogeny with gag and pol sequences, as well as to implement a genomic library of SRLVs isolated in some Brazilian states. Initially, goats and sheep were screened using the AGID technique, confirmed by Western blotting with subsequent isolation of virus in goat synovial membrane (GSM) from positive samples. Nested-PCR was performed to confirm the presence of the virus and for amplification of regions of interest, followed by sequencing of individual samples. Comparisons were made through alignments of the gag and pol regions of the strains, besides assembling the genomic library of isolated SRLVs. The results were the isolation of circulating virus strains of naturally infected animals at Rio Grande do Norte, Ceará, Piauí, Bahia and Minas Gerais states. The strain isolate, called BrRN-CNPC.G1 were considered the first isolation of small ruminant lentiviruses from naturally infected goat in flock of Rio Grande do Norte, Brazil. The strains demonstrated phenotypically litic, type rapid/high. In the present work, virus strains isolated from Ceará, Minas Gerais and Rio Grande do Norte were amplified and sequenced for gag and pol genes. The genealogy proposed for gag and pol gene was compatible with subtypes B from CAEV. The alignment of amino acid sequences from gag gene was divergent between the strains this study and the standart strain CAEV-Cork. The amino acids were more divergent in sequences of the pol gene. Key-words: Lentiviruses, Phylogeny, gag, pol, CAEV, MVV
Tipo do Trabalho:
Tese
Referência:
Feitosa, Aryana Lushese Vasconcelos Lima. Caracterização molecular de lentivírus de pequenos ruminantes isolados no Brasil. 2011. 175 f. Tese (Doutorado em 2011) - Universidade Estadual do Ceará, , 2011. Disponível em: Acesso em: 4 de maio de 2024
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