Utilização da água de coco em pó (ACP-204) como meio de manutenção e crescimento de células C6/36 (clone de Aedes albopictus SKUSE, 1894) e cultivo do vírus da dengue sorotipo 2
Autor(es):
Andrade, José Maciel
Palavras Chaves:
Não informado
Ano de Publicação:
2011
Resumo:
O cultivo de células C6/36 (clone Aedes albopictus Skuse, 1894), em meio nutriente de Leibovitz (L-15) é amplamente utilizado para isolamento de arbovírus, em especial o vírus da dengue. O presente trabalho teve como objetivo analisar a utilização da água de coco em pó (ACP-204) como meio de manutenção e crescimento de células C6/36 bem como sua utilização para meio de cultivo do vírus dengue sorotipo 2. A cultura das células C6/36 foi realizada em meio L-15 (meio de cultura Leibovitz com glutamina, Cultilab®) e em meio ACP-204, suplementado com peptonas a 1,58%. As células C6/36 foram cultivadas em garrafa de cultura de 25 cm2 e mantidas em estufa a 28 ºC. Culturas de células C6/36 estoque foram conservadas a (-80 °C). Alíquotas de células C6/36 cultivadas em meio L-15 e em meio ACP-204 por um período de sete dias foram submetidas ao Método de Transcrição e Translação (MTT) para análise da viabilidade celular. Após análise da viabilidade das células C6/36 nos meios L-15 e
ACP-204 fez-se a inoculação da suspensão do vírus DENV-2 em ambos os meios e incubouse por sete dias em temperatura ambiente. Em seguida, foi realizado, em cada lote: o MTT para análise de viabilidade celular; a técnica de imunofluorescência indireta, que oferece subsídios para classificação e identificação de vírus que replicam em células C6/36; e a RTPCR, que possibilita a amplificação de sequências genômicas específicas de RNA viral delimitadas por iniciadores (primers). Células não inoculadas com DENV-2 foram utilizadas como controle. Os achados evidenciados pelo MTT mostraram que o meio ACP-204 funcionou no mesmo padrão de equivalência do meio L-15 para cultura de células C6/36. E no que se refere ao cultivo da suspensão viral do DENV-2, o MTT revelou que o vírus dengue comportou-se com parâmetro semelhante ao do meio L-15. Resultados obtidos pela imunofluorescência indireta e RT-PCR evidenciaram a presença do DENV-2 no interior das células C6/36 em ambos os meios. Os achados demonstraram que o ACP-204 funcionou de forma satisfatória como meio de manutenção e crescimento de células C6/36 e para meio de cultivo do vírus dengue sorotipo 2. Palavras-chave: Dengue. Meio de cultura. Água de coco em pó. Células C6/36. Sorotipo 2.
Abstract:
The culture of cells C6/36 (clone Aedes albopictus Skuse, 1894) in Leibovitz nutritive broth (L-15) is widely used for the isolation of Arbovirus, especially Dengue virus. The present work aimed to analyze the use of powder coconut water (PCW-204) to maintain and grow cells C6/36 and its use as a cultivation medium for Dengue virus, serotype 2 (DENV-2). The cultivation of cells C6/36 was performed in L-15 medium (Leibovitz culture medium, supplemented with glutamine, Cultilab®) and in PCW-204 supplemented with 1.58% peptone. C6/36 cells were cultivated in 25 cm2 culture bottles and incubated at 28 oC. Stock C6/36 cell cultures were conserved at -80 °C. Aliquots of C6/36 cells cultivated in L-15 or PCW-204, during seven days were submitted to transcription-translation method (TTM) in order to analyze cell viability. After cell viability analysis of C6/36 cells grown in L-15 or PCW-204 media, DENV-2 suspension was inoculated in both media and the bottles were incubated for seven days, at room temperature. Afterwards, each cell culture was evaluated through: TTM, to assess cell viability; indirect immunofluorescence, to confirm the identity of the replicating virus within C6/36 cell culture; and RT-PCR, to amplify specific genomic sequences of the viral RNA that are within primer-delimited regions. Non-inoculated cells were used as control. The findings observed through TTM showed that PCW-204 medium obtained equivalent results, when compared to L-15 medium for the culture of C6/36 cells. Concerning the cultivation of DENV-2 suspension, TTM showed that DENV-2 presented similar parameters, when comparing both media. Results obtained through indirect immunofluorescence and RT-PCR made evident the presence of DENV-2 within C6/36 cells grown in both media. These findings showed that PCW-204 medium presented satisfactory results for the growth and maintenance of C6/36 cells and for the cultivation of Dengue virus, serotype 2. Key words: Dengue. Culture broth. Powder coconut water. C6/36 cells. Serotype 2.
Tipo do Trabalho:
Tese
Referência:
Andrade, José Maciel. Utilização da água de coco em pó (ACP-204) como meio de manutenção e crescimento de células C6/36 (clone de Aedes albopictus SKUSE, 1894) e cultivo do vírus da dengue sorotipo 2. 2011. 180 f. Tese (Doutorado em 2011) - Universidade Estadual do Ceará, , 2011. Disponível em: Acesso em: 13 de maio de 2024
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