Caracterização molecular do gene phoP de Corynebacterium pseudotuberculosis e avaliação do potencial vacinal da linhagem PhoP mutante
Autor(es):
Costa, Marcília Pinheiro da
Palavras Chaves:
Não informado
Ano de Publicação:
2011
Resumo:
Corynebacterium pseudotuberculosis é o agente etiológico da linfadenite caseosa (LC),
uma enfermidade crônica contagiosa que acomete pequenos ruminantes e acarreta sérias
perdas econômicas para a ovinocaprinocultura. Apesar da prevalência mundial da LC e das
intensas pesquisas em torno deste microorganismo ainda não existem métodos diagnósticos e
profiláticos totalmente eficazes contra esta doença. Conhecer o genoma deste patógeno é um
importante passo para auxiliar de forma significativa o entendimento sobre os mecanismos de
virulência, assim como, facilitar a busca por novos alvos, visando o desenvolvimento de
produtos biotecnológicos eficazes contra LC. Propomos, portanto, neste trabalho a execução
das abordagens genômica e pós-genômica, iniciando com uma colaboração no
sequenciamento e fechamento do genoma completo deste patógeno, e posteriormente na
vertente pós-genômica objetivamos usar os dados gerados através de anotação e busca de
genes para o desenvolvimento de uma vacina viva recombinante. Diante do repertório
genômico disponível com o sequenciamento de C. pseudotuberculosis, importantes genes
filogeneticamente relacionados com Mycobacterium tuberculosis foram identificados por
estudos comparativos de similaridade, dentre eles o gene phoP. Em M. tuberculosis, diversos
estudos relatam a eficiência de mutantes do gene phoP usados como vacina viva atenuada, os
quais têm demonstrando potente resposta imunológica e proteção em diferentes modelos
animais, como por exemplo murino e cobaia. Como parte integrante do operon PhoPR de C.
pseudotuberculosis, a ORF phoP foi selecionada como alvo deste trabalho, e algumas
estratégias foram traçadas: (i) caracterização in silico do operon PhoPR; (ii) expressão e
caracterização da proteína recombinante rPhoP; (iii) construção e caracterização de uma
linhagem mutante do gene phoP; e (iv) avaliação dos níveis de proteção conferidos por esta
linhagem em modelo murino. Os resultados demonstram alta similaridade do gene phoP de C.
pseudotuberculosis com espécies do gênero Mycobacterium. A proteína rPhoP (237 aa) foi
expressa de forma satisfatória e submetida a ensaios de imunodetecção. Quanto aos testes
com a linhagem phoP mutante de C. pseudotuberculosis, estes têm se mostrado promissores,
apresentando uma proteção parcial contra a infecção causada por esta bactéria. Porém,
ensaios complementares estão sendo realizados para avaliar a viabilidade de se usar esta
linhagem como vacina viva atenuada como meio profilático, eficaz e seguro, contra a LC.
Palavras-chave: C.pseudotuberculosis, linfadenite caseosa, phoP.
Abstract:
Corynebacterium pseudotuberculosis is the etiological agent of caseous lymphadenitis
(CLA), a chronic illness that affects small ruminants and cause significant economic losses for
ovine and caprine producers. Despite of the worldwide prevalence of CLA and of researches
around this microorganism, still does not exists effective diagnostics and prophylatics methods
against this disease. The complete genome sequences this pathogen is an important step for
the understanding of the virulence mechanisms, and identifies novel candidates to development
of biotechnological products against CLA. Then, we propose in this work the execution of the
approaches genomic and post-genomic, initiating with the whole-genome this bacterium and
using the data generated through annotation and data-mining for the development of a live
recombinant vaccine. With the availability of genomic resources of C. pseudotuberculosis
important phylogenetic related genes with Mycobacterium tuberculosis were identified for
comparative study of similarity, among them the phoP gene. Several studies have demonstrated
that M. tuberculosis PhoP mutant strains used as attenuated vaccine confers a potent immune
response and protection in different animal models, for instance mice and guinea pigs. Integrant
of PhoPR operon from C. pseudotuberculosis, the phoP ORF was selected as target this work,
and some strategies were developed: (i) characterization in silico of the PhoPR operon; (ii)
expression and characterization of the rPhoP protein; (iii) construction and characterization of a
C. pseudotuberculosis mutant strain in gene phoP; and (iv) evaluation of the protection levels
this mutant strain in murino model. The results demonstrated high similarity of the phoP gene of
C. pseudotuberculosis with species of the genus Mycobacterium. The rPhoP protein (237 aa)
was satisfactorily expressed and submitted to immunodetection assay. The tests with C.
pseudotuberculosis strain with the phoP gene inactivated showed promising, presenting a
partial protection against the infection caused by this bacterium. However, complementary
assays are being accomplished to evaluate the viability of using this live attenuated vaccine as
an effective and safe resource prophylaxis against CLA.
Keywords: C. pseudotuberculosis, caseous lymphadenitis, phoP.
Tipo do Trabalho:
Tese
Referência:
Costa, Marcília Pinheiro da. Caracterização molecular do gene phoP de Corynebacterium pseudotuberculosis e avaliação do potencial vacinal da linhagem PhoP mutante. 2011. 270 f. Tese (Doutorado em 2011) - Universidade Estadual do Ceará, , 2011. Disponível em: Acesso em: 2 de maio de 2024
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