Partição da lectina de canavalia grandiflora Benth em sistemas de duas fases aquosas e aplicação em processo cicatricial
Autor(es):
Porto, Camila Souza
Palavras Chaves:
Não informado
Ano de Publicação:
2010
Resumo:
O processo de purificação é um passo limitante para utilização de biomoléculas
na área da biotecnologia, em especial as lectinas, devido ao elevado custo
podendo chagr a 90%, bem como ao grande número de etapas para se obter
uma molécula pura, resultando em um baixo rendimento. Deste modo, o
sistema de duas fases aquosas (SDFA) foi proposto como uma alternativa para
a purificação da lectina extraída da semente de Canavalia grandiflora (ConGF).
O comportamento da partição da lectina ConGF foi realizado utilizando-se um
planejamento fatorial (24
) para partição e recuperação em sistemas formados
por polietileno glicol (PEG); sais citrato e fosfato, onde foram avaliadas quatro
variáveis (concentração e massa molar do PEG, concentração de sal e pH).
Além disso, foram realizados ensaios de atividade antimicrobiana e do
potencial cicatrizante da lectina frente a lesões experimentais durante 12 dias
de tratamento com uma solução de 100µg/mL de lectina ConGF. A partir dos
resultados pode-se constatar que a lectina de Canavalia grandiflora particionou
preferencialmente para fase rica em polímero (PEG) e o sistema formado por
PEG 400 (g/mol) a 20% (m/m), citrato 20% (m/m) e pH 6,0, foi a melhor
condição obtida para o coeficiente de partição (8,67) e recuperação (104%).
Para o sistema PEG/fosfato, a lectina particionou preferencialmente para a fase
rica em sal, apresentando um coeficiente de partição de 0,03 e recuperação de
1600%. O SDFA revelou-se capaz de recuperar a lectina ConGF sem perda de
sua atividade, demonstrando ser um sistema seletivo para esta proteína,
permitindo que este sistema seja usado como o primeiro passo para a
purificação de lectina obtida a partir do extrato bruto das sementes da
Canavalia grandiflora, pois permitiu a separação rápida, sem desnaturação,
com baixo custo e boa seletividade. A atividade antimicrobiana da ConGF
frente a bactérias patogênicas não foi detectada e as lesões do grupo tratado
apresentam-se macroscopicamente e microscopicamente com completa
epitelização, enquanto que as feridas do grupo controle necessitavam de mais
tempo para resolução do processo cicatricial.
Palavras-chave: Sistema de duas fases aquosas, lectina, Canavalia grandiflora,
planejamento fatorial, PEG/citrato, Cicatrização, Reepitelização
Abstract:
The purification process is a limiting step of biomolecules for use in processes
in biotechnology, especially lectins, due to the cost of up to 90%, and the large
number of steps to obtain the pure molecule, resulting in a low yield. Thus, the
aqueous two-phase system (ATPS) was proposed as an alternative for the
purification of lectin from Canavalia grandiflora seed (ConGF), because it
allowed the rapid separation without denaturation, with low cost and good
selectivity. With the aim of understanding the behavior of the partition of the
lectin ConGF used a factorial design (24
) to partition and recovery using
systems formed by polyethylene glycol (PEG) and phosphate and citrate salts,
which were evaluated four variables (concentration and PEG molar mass, salt
concentration and pH). In addition, tests were performed antimicrobial activity
and wound healing potential of the lectin against experimental lesions during 12
days of treatment with a lectin ConGF solution (100µg/mL). The results can be
seen that the lectin from Canavalia grandiflora preferentially partitioned to the
polymer (PEG) rich phase and the system formed by PEG 400 (g/mol) 20%
(w/w), citrate (20% w/w), pH 6.0, the best condition was obtained for the
partition coefficient (8.67) and activity yield (104%). For the PEG/ phosphate
system, the lectin preferentially partitioned to the salt-rich phase, showing a
partition coefficient of 0.03 and activity yield of 1600%. The ATPS proved to be
able to recover the ConGF lectin without loss of its activity, demonstrating that a
selective system for this protein, allowing this system could be used as the first
step for the purification of lectin obtained from the crude extract of the
Canavalia grandiflora seeds. The antimicrobial activity was not detected ConGF
and lesions in the treated group presentation was macroscopically and
microscopically complete healing while the wounds of the control group needed
more time toresolution of the healing process.
Keywords: Aqueous two phase systems, Lectin, Canavalia grandiflora, Factorial
design, PEG/citrate, PEG/phosphate, Wound healing, re-epithelialization
Tipo do Trabalho:
Tese
Referência:
Porto, Camila Souza. Partição da lectina de canavalia grandiflora Benth em sistemas de duas fases aquosas e aplicação em processo cicatricial. 2010. 129 f. Tese (Doutorado em 2010) - Universidade Estadual do Ceará, , 2010. Disponível em: Acesso em: 29 de abril de 2024
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