Determinação de uma solução para congelação lenta de tecido ovariano caprino: utilização de propanodiol e agentes antioxidantes
Autor(es):
Luz, Hiédely Kenia Machado
Palavras Chaves:
Não informado
Ano de Publicação:
2010
Resumo:
Há quase cinco décadas, a criopreservação de tecido ovariano (TO) tem sido alvo de
estudos com a finalidade de auxiliar na tecnologia de reprodução assistida em animais
domésticos e até mesmo em humanos. No entanto, danos causados pelo processo de
criopreservação, como o estresse oxidativo, podem levar à morte celular. Neste sentido,
a associação de agentes antioxidantes aos agentes crioprotetores (ACP) na solução de
congelação pode preservar a morfologia e a viabilidade dos folículos presentes no TO.
O presente trabalho teve como objetivos: 1) determinar a melhor concentração e tempo
de exposição ao ACP (propanodiol – PROH); 2) verificar o efeito de antioxidantes na
solução de congelação de tecido ovariano caprino sobre a morfologia, viabilidade e
quantificação do estresse oxidativo dos folículos pré-antrais. Para isso, foram realizados
dois experimentos. No experimento I, 12 fragmentos de TO foram tratados (expostos
e/ou expostos e congelados) na presença de 1,0 M ou 1,5 M de PROH por 5, 10 ou 20
minutos. No experimento II, o tecido ovariano foi congelado com 1,0 M de PROH por 5
min na ausência ou presença de catalase (5, 10 ou 20 UI/mL) ou trolox® (0,1, 0,5 ou 1,0
mM). A avaliação folicular após a congelação foi realizada por histologia clássica (HC)
e teste de viabilidade por azul de tripan (AT), para os experimentos I e II, além da
quantificação de malonaldeído (MDA) no experimento II, visando a mensuração do
estresse oxidativo. Os resultados foram expressos como média ± SD e o teste utilizado
para análise morfológica e viabilidade folicular foi o teste t de Student (P < 0,05). A HC
mostrou que no experimento I, o percentual de folículos pré-antrais morfologicamente
normais no controle foi similar ao observado nos fragmentos somente expostos ao
PROH. Por outro lado, foi significativamente superiores àqueles fragmentos
congelados. Ao comparar as percentagens de folículos morfologicamente normais entre
a exposição e a criopreservação, verificou-se que em 1,0 M por 5 min e 1,5 M por 5 e
10 min apresentaram um percentual significativamente maior de folículos normais após
a congelação. No tocante à viabilidade folicular, os fragmentos congelados em PROH
1,0 M por 5 e 10 min, apresentaram um percentual de folículos pré-antrais viáveis
semelhante ao observado no controle. No experimento II, a HC mostrou que os
tratamentos em que foram adicionados catalase nas concentrações de 10 ou 20 UI/mL
ou ainda, trolox® na concentração de 0,1 mM foram similares ao controle e
significativamente superiores ao tratamento congelado sem antioxidantes. Apesar de
não ter sido realizada análise estatística para o teste da peroxidação lipídica, os dados numéricos mostraram que o tratamento com catalase 20UI/mL apresentou menor
quantidade de MDA quando comparado aos demais tratamentos testados (controle
fresco, criopreservado sem antioxidante, catalase 10 UI/mL e trolox® 0,1mM). Em
conclusão, o TO caprino pode ser criopreservado com sucesso na presença de 1,0M de
PROH, exposto por 5 min. Além disso, a enzima catalase na concentração de 20UI/mL,
mantém a viabilidade folicular e reduz o estresse oxidativo (peroxidação lipídica) após
congelação de tecido ovariano caprino.
Palavras-chave: Congelação lenta. Folículo pré-antral. Estresse oxidativo. Catalase.
Trolox®.
Abstract:
For nearly five decades, cryopreservation of ovarian tissue (OT) has been
investigated with the purpose of assisting in assisted reproductive technology in
domestic animals and even humans. However, damages caused by the cryopreservation
process, such as oxidative stress, can lead to cell death. In this sense, the combination of
antioxidants to cryoprotectants (ACP) in the freezing solution can to preserve the
viability and morphologyof follicles present in the OT. This study aimed to: 1)
determine the optimal concentration and exposure time (ACP propanediol - PROH), 2)
determine the effect of antioxidants in the freezing solution of goat ovarian tissue on
morphology, viability and quantification of oxidative stress preantral follicles. For this,
two experiments were conducted. In experiment I, 12 OT fragments were treated
(exposed and / or exposed and frozen) in the presence of 1.0 M or 1.5 M PROH for 5,
10 or 20 minutes. In experiment II, the ovarian tissue was frozen with 1.0 M PROH for
5 min in the absence or presence of catalase (5, 10 or 20 U/mL) or trolox ® (0.1, 0.5 or
1.0 mM). The follicular assessment after freezing was done by histology (HC) and
viability test by trypan blue (TB) for experiments I and II, and the quantification of
malondialdehyde (MDA) in experiment II, aimed at measuring the stress oxidative.
Results were expressed as mean ± SD and the test used for morphological analysis and
follicular viability was the Student t test (P <0.05). The HC showed that in the first
experiment, the percentage of primordial follicles with normal morphology in the
control was similar to that observed only in fragments exposed to PROH. On the other
hand, was significantly higher than those frozen fragments. When comparing the
percentages of morphologically normal follicles between exposure and
cryopreservation, it was found that at 1.0 M for 5 min and 1.5 M for 5 and 10 min
showed a significantly greater percentage of normal follicles after freezing. Regarding
follicular viability, the fragments frozen in 1.0 M PROH for 5 and 10 min, showed a
percentage of viable preantral follicles similar to that observed in control. In experiment
II, the HC showed that treatments with catalase were added at concentrations of 10 or
20 U/mL or trolox®, at a concentration of 0.1 mM was similar to control treatment and
superior to frozen without antioxidants. Although no statistical analysis was performed
to test the lipid peroxidation, the figures showed that treatment with catalase 20 U/mL
MDA was less than the other treatments (control fresh, cryopreserved, without antioxidant, catalase 10 U/mL and 0.1 mM trolox®). In conclusion, OT can be
cryopreserved goat successfully in the presence of 1.0 M PROH, exposed for 5 min. In
addition, catalase at a concentration of 20 U/mL maintains follicular viability and to
reduce oxidative stress (lipid peroxidation) after freezing ovarian tissue goat.
Keywords: Slow freezing. Preantral follicles. Oxidative stress. Catalase.
Trolox®.
Tipo do Trabalho:
Dissertação
Referência:
Luz, Hiédely Kenia Machado. Determinação de uma solução para congelação lenta de tecido ovariano caprino: utilização de propanodiol e agentes antioxidantes. 2010. 114 f. Dissertação (Mestrado Acadêmico ou Profissional em 2010) - Universidade Estadual do Ceará, , 2010. Disponível em: Acesso em: 3 de maio de 2024
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