Criopreservação de tecido ovariano de cutia (Dasyprocta aguti Linnaeus, 1766)
Autor(es):
Wanderley, Livia Schell
Palavras Chaves:
Não informado
Ano de Publicação:
2010
Resumo:
O objetivo deste trabalho foi desenvolver um protocolo eficiente para a criopreservação de tecido ovariano de cutia {Dasyprocta aguti). Para tanto, ovários (n=10) de cutias adultas foram coletados e transportados ao laboratório em Meio Essencial Mínimoo(MEM) a 4 C. Em seguida, cada ovário foi dividido em quatro fragmentos de tamanhos iguais (4 mm x 4 mm x 1 mm). Dois fragmentos de cada par ovariano foram imediatamente fixados para histologia clássica e análise ultraestrutural, constituindo o controle. Os fragmentos restantes foram somente expostos (n=3) por 10 min em solução composto por MEM, soro fetal bovino (SFB) na presença de 1,5 M de dimetilsulfóxido (DMSO), etilenoglicol (EG) ou propanodiol (PROH), os demais fragmentos (n=3) foram expostos e, em seguida, congelados em freezer programável. Após a exposição e/ou descongelação, todos os fragmentos foram fixados em Carnoy para histologia clássica e destinados à análise morfológica. Cada tratamento foi repetido 5 vezes. Decorrido o tempo de fixação, os fragmentos ovarianos foram submetidos aos procedimentos de rotina para histologia clássica, seccionados à espessura de 7 um e corados com hematoxilina-eosina. Os folículos pré-antrais foram classificados como morfologicamente normais (FMN) ou degenerados, com base na integridade do oócito, células da granulosa e membrana basal. Para avaliação da ultraestrutura, os folículos do controle e de todos os tratamentos criopreservados foram fixados em Karnovsky e processados para análise de microscopia eletrônica (MET). Para a análise estatística, os resultados foram expressos como média ± D.P., submetidos à ANOVA e analisados pelo teste de Student-Newman-Keuls. Os valores foram considerados significativos quando P < 0,05. A análise histológica mostrou que após os procedimentos de exposição e congelação houve uma diminuição significativa no percentual de FMN em todos os tratamentos, quando comparados ao controle (92,67 ± 2,79). No entanto, não houve diferença significativa quando os procedimentos de exposição e congelação foram comparados entre si, utilizando o mesmo crioprotetor. Além disso, não foi observada diferença significativa entre os agentes crioprotetores tanto no período de exposição (DMSO: 64,67 ± 3,80 EG: 70,67 ±11,16 PROH: 63,33 ± 8,50) quanto após a congelação (DMSO: 60,64 ± 3,64 EG: 64,00 ± 11,88 PROH: 62,00 ± 6,91). Entretanto, a análise de MET revelou que somente os folículos congelados na presença do propanodiol apresentaram ultraestrutura normal. Diante disso, pode-se concluir que folículos pré-antrais inclusos no tecido ovariano de cutia podem ser criopreservados com sucesso utilizando 1,5 M de PROH, com manutenção satisfatória da sua morfologia e ultraestrutura.Palavras-chave: folículos pré-antrais, congelação, cutia, ultraestrutura, morfologia folicular
Abstract:
The aim of this study was to develop an efficient protocol for the cryopreservation of
agouti (Dasyprocta aguti) ovarian tissue. For this purpose, ovaries (n = 10) were
collected from adult agoutis and transported to the laboratory in Minimal Essential
Medium (MEM) at 4°C. Then the ovaries were divided into four equal portions
(approximately 4 mm x 4 mm x 1 mm). Two pieces from each pair were immediately
fixed for histological and ultrastructural analysis, and these constituted the control. The
other fragments were only exposed (n = 3) for 10 min in a solution containing MEM
and fetal bovine serum to the presence of 1.5 M dimethyl sulfoxide (DMSO), ethylene
glycol (EG) or propanediol (PROH), while the remaining fragments (n = 3) were
exposed and then frozen in a programmable freezer. After exposure and/or thawing, all
samples were fixed in Carnoy for histology and were destined for morphological
analysis. Each treatment was repeated five times. After fixation, the ovarian fragments
were subjected to routine histology procedures, sectioned at a 7-µm thickness and
stained with hematoxylin-eosin. The preantral follicles were classified as
morphologically normal (MNPF) or degenerated based on the integrity of the oocyte,
granulosa cells and basement membrane. To evaluate the ultrastructure, the follicles
from the control and all cryopreserved treatments were fixed in Karnovsky and
processed for transmission electron microscopy (TEM) analysis. For statistical analysis,
the results were expressed as the mean ± SD, subjected to ANOVA and analyzed by
Student-Newman-Keuls test. Values were considered significant when P < 0.05.
Histological analysis showed that after the procedures of exposure and freezing, there
was a significant decrease in the percentage of MNPF in all treatments when compared
to the control (92.67 ± 2.79). However, no significant difference was observed when the
exposure and freezing procedures were compared using the same cryoprotectant.
Moreover, there was no significant difference among cryoprotectants at the time of
exposure (DMSO: 64.67 ± 3.80; EG: 70.67 ± 11.16, PROH: 63.33 ± 8.50) or after
freezing (DMSO: 60.64 ± 3.64, EG: 64.00 ± 11.88; PROH: 62.00 ± 6.91). However,
TEM analysis revealed that only follicles frozen with PROH had normal ultrastructure.
Thus, it can be concluded that preantral follicles enclosed in agouti ovarian tissue can be
successfully cryopreserved using 1.5 M PROH with a satisfactory maintenance of
follicular morphology and ultrastructure.
Keywords: preantral follicles, freezing, agouti, ultrastructure, follicular morphology.
Tipo do Trabalho:
Dissertação
Referência:
Wanderley, Livia Schell. Criopreservação de tecido ovariano de cutia (Dasyprocta aguti Linnaeus, 1766). 2010. 81 f. Dissertação (Mestrado Acadêmico ou Profissional em 2010) - Universidade Estadual do Ceará, , 2010. Disponível em: Acesso em: 3 de maio de 2024
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