Água de coco em pó (ACP-104) adicionada de crioprotetores sobre a morfometria da cabeça de espermatozóides de Pirapitinga (Piaractus brachypomus) pós-descongelamento
Autor(es):
Melo, Mônica Aline Parente
Palavras Chaves:
Não informado
Ano de Publicação:
2010
Resumo:
O objetivo do presente estudo foi avaliar a associação de diluentes e crioprotetores
sobre a morfometria da cabeça de espermatozóides de Pirapitinga (Piaractus
brachypomus) pós-descongelação em relação ao sêmen fresco. Trinta machos de
Pirapitinga foram hipofisados 14 horas antes da coleta do sêmen. Uma alíquota de cada
amostra seminal válida foi fixada para análise da morfometria e o restante constituiu o
pool que foi dividido em três partes. A primeira parte foi criopreservada em ACP-104
ou Ringer adicionados de 10% de Dimetilsulfóxido (DMSO) ou 10% de Metilglicol
(MG), com taxa de diluição de 1:4 ou 1:6 (sêmen:diluente) e acondicionadas em
palhetas francesas de 0,5 mL. A segunda, juntamente com as amostras individuais de
cada animal, foi fixada para posterior análise morfométrica. A terceira foi transportada
ao laboratório em isopor a 4ºC para análises de motilidade objetiva pós-ativação. Todas
as análises foram realizadas com o auxílio do software Sperm Class Analyzer. Após 45
dias, as palhetas foram descongeladas e os espermatozóides foram avaliados em relação
à motilidade e morfometria. Os dados foram submetidos à Análise de Variância e a
motilidade foi comparada através do teste de Kruskal-Wallis. Os dados morfométricos
foram comparados entre os tratamentos através do teste SNK e com o controle pelo teste
de Dunnett (p<0,05), sendo expressos em média e desvio padrão. Após a
descongelação, todos os tratamentos apresentaram motilidade significativamente
inferior ao controle, e as amostras criopreservadas com ACP-104 apresentaram
motilidade significativamente superior às amostras criopreservadas com Ringer. Em
relação à morfometria da cabeça dos espermatozóides frescos, estes apresentaram
comprimento de 3,3784±0,132μm, largura 2,3391±0,075μm, área 7,3130±0,386μm
2
,
perímetro 9,7249±0,332μm, elongação 0,1843±0,018, elipticidade 1,4592±0,055,
regularidade 0,8536±0,009 e rugosidade 0,9589±0,027. Após a criopreservação, não foi
observada influência da taxa de diluição utilizada em nenhum dos parâmetros avaliados,
além disso, as amostras criopreservadas com Ringer apresentaram área, perímetro,
largura e comprimento similares ao controle. Também não houve diferenças
significativas dos efeitos testados sobre as variáveis regularidade e rugosidade (p>0,05).
As amostras criopreservadas com ACP-104 apresentaram medidas significativamente
superiores de comprimento e perímetro que as criopreservadas com Ringer. Com
relação à largura e conseqüentemente à área, as amostras criopreservadas com ACP-104
8
apresentaram medidas significativamente superiores ao controle e às amostras
criopreservadas com Ringer. Houve uma redução significativa da elipticidade e
elongação em todos os tratamentos pós-descongelação em relação ao controle. Além
disso, as amostras criopreservadas com ACP-104 apresentaram uma redução
significativa desses dois parâmetros em relação às amostras criopreservadas com
Ringer. Conclui-se que, diante de uma melhor motilidade espermática e maior alteração
de cabeça pós-descongelação, provavelmente, a criopreservação com ACP-104 tornou
os espermatozóides mais adaptados a sobreviver em condições desfavoráveis. Esse
trabalho foi aprovado pelo CEUA (Comitê de Ética para o Uso de Animais da
Universidade Estadual do Ceará) com protocolo número 09230730-2.
Palavras-chave: Peixe. Sêmen. Análise Seminal Auxiliada por Computador.
Abstract:
This study was designed to evaluate the association of extenders and cryoprotectants on
the sperm head morphometry of Pirapitinga (Piaractus brachypomus) after thawing
compared to fresh semen. Thirty Pirapitinga males were hypophysed 14 hours before
semen collection. One aliquot of each seminal sample valid was fixed for morphometric
analysis and the remainder formed the pool which was divided into three parts. The first
part was frozen in PCW-104 or Ringer added 10% of Dimethyl sulfoxide (DMSO) or
10% of methylglycol (MG) with a dilution rate of 1:4 or 1:6 (semen: extender) and
filled into 0.50 mL straws. The second, together with individual samples from each
animal, was fixed for subsequent morphometric analysis. The third was transported to
the laboratory in styrofoam at 4 ° C for analysis of objective motility post-activation.
All analysis was carried out using the software Sperm Class Analyzer. After 45 days,
the straws were thawed and sperm were assessed for motility and morphology. The data
were submitted to ANOVA and motility was compared using the Kruskal-Wallis.
Morphometric data were compared between treatments using the SNK test and the
control by Dunnett test (p<0.05), expressed as mean and standard deviation. After
thawing, all treatments had significantly lower motility compared to the control, and the
samples preserved in PCW-104 had significantly higher motility compared to those
preserved in Ringer (p<0.05). Related to sperm head morphometry of fresh semen, the
means values were: length 3.3784±0.132μm, width 0.075±2.3391μm, area
0.386±7.3130μm
2
, perimeter 9.7249±0.332μm, elongation 0.1843±0.018, ellipticity
0.055±1.4592, regularity 0.8536±0.009 and roughness 0.9589±0.027. After
cryopreservation, there was no influence of dilution rate used in any of the parameters
evaluated, in addition, the samples preserved in Ringer showed area, perimeter, length
and width similar to control. There were also no significant differences in the effects on
the variables regularly and roughness (p> 0.05). The samples cryopreserved in PCW104 had significantly higher measures of length and perimeter that preserved in Ringer
(p<0.05). Respect to the width and consequently the area, samples cryopreserved in
PCW-104 were significantly superior to the control measures and to the samples
preserved in Ringer (p<0.05). There was a significant reduction in the ellipticity and
elongation in all treatments after thawing as compared to control (p<0.05). In addition,
samples cryopreserved in PCW-104 showed a significant reduction of these two
10
parameters compared to samples preserved in Ringer (p<0.05). It can be conclude that,
with a better sperm motility and greatest change in head after thawing, probably,
cryopreservation in PCW-104 made the sperm more adapted to survive in unfavorable
conditions. This study was approved by CEUA (Ethics Committee for Animal Use of
the Ceará State University) with protocol number 09230730-2.
Keywords: Fish. Semen. Computer-assisted Semen Analysis.
Tipo do Trabalho:
Dissertação
Referência:
Melo, Mônica Aline Parente. Água de coco em pó (ACP-104) adicionada de crioprotetores sobre a morfometria da cabeça de espermatozóides de Pirapitinga (Piaractus brachypomus) pós-descongelamento. 2010. 63 f. Dissertação (Mestrado Acadêmico ou Profissional em 2010) - Universidade Estadual do Ceará, , 2010. Disponível em: Acesso em: 29 de março de 2024
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