Utilização de progesterona, estradiol, androstenediona e hormônio folículo-estimulante no cultivo in vitro de folículo pré-antrais caprino
Autor(es):
Lima-Verde, Isabel Bezerra
Palavras Chaves:
Não informado
Ano de Publicação:
2009
Resumo:
O objetivo deste trabalho foi verificar os efeitos da progesterona, da androstenediona e do
estradiol, na presença ou ausência de hormônio folículo-estimulante (FSH), sobre a
sobrevivência, ativação e o crescimento de folículos pré-antrais caprinos. Fragmentos de
tecido ovariano foram cultivados por 1 ou 7 dias em Meio Essencial Mínimo modificado
(MEM+) sozinho ou contendo progesterona (1, 2.5, 5, 10 ou 20 ng/mL – experimento 1),
estradiol (1, 5, 10, 20 ou 40 pg/mL - experimento 2) ou androstenediona (10, 50 ou 100
ng/mL -experimento 3) na presença ou ausência de FSH (50 ng/mL). O tecido ovariano nãocultivado (controle fresco) e o cultivado nos diferentes tratamentos foi processado para
análise utilizando as técnicas de histologia clássica e microscopia eletrônica de transmissão
(experimentos 1 e 2) ou microscopia de fluorescência (experimento 3). Após 7 dias de cultivo,
os resultados do experimento 1 mostraram que a adição de FSH a todas as concentrações de
progesterona manteve o percentual de folículos normais similar ao controle fresco. Nesse
mesmo período um alto percentual de ativação folicular foi observado somente nos
tratamentos com 2,5 ng/mL de progesterona + FSH ou 10 ng/mL de progesterona sozinha, em
relação ao controle. Além disso, conforme o período de cultivo progrediu de 1 para 7 dias,
houve um aumento significativo no percentual de folículos ativados nos tratamentos com 2,5
ng/mL de progesterona + FSH e no MEM+. Em todos os tratamentos após 7 dias houve um
aumento significativo no diâmetro follicular em relação ao controle fresco, exceto nos
tratamentos MEM+, 5 ng/mL de progesterona + FSH ou 10 ng/mL de progesterona. A análise
ultra-estrutural confirmou a integridade folicular no tratamento com 2,5 ng/mL de
progesterona + FSH após 7 dias de cultivo. Com relação ao experimento 2, após 7 dias de
cultivo, os tratamentos com 1, 5 ou 20 pg/mL de estradiol + FSH resultaram em percentuais
de folículos normais significativamente superiores ao tratamento com MEM+ e todos os
tratamentos testados exibiram percentuais de ativação folicular significativamente superiores
ao controle fresco e ao MEM+. Além disso, nesse período, a adição de FSH ao meio contendo
estradiol (1, 5, 10 ou 20 pg/mL) aumentou significativamente o diâmetro folicular em relação
ao MEM+. Vale ressaltar que a análise ultra-estrutural confirmou a integridade folicular
apenas para o tratamento com 1 pg/mL de estradiol + FSH. No experimento 3, em relação ao
controle fresco, houve uma redução significativa no percentual de folículos normais e um
aumento no percentual de ativação em todos os tratamentos com androstenediona testados
após 7 dias de cultivo. Ainda dentro desse período, não foi verificada diferenças entre o
cultivo com MEM+ e os demais tratamentos com relação ao percentual de folículos ativados.
Após 1 ou 7 dias todos os tratamentos tiveram diâmetros folicular e oocitário semelhantes ao
controle fresco e ao MEM+. A análise através de microscopia de fluorescência demonstrou
que somente os fragmentos cultivados com 50 ou 100 ng/mL de androstenediona + FSH
mostraram percentuais de folículos viáveis similares ao tratamento com MEM+. Os resultados
obtidos neste trabalho mostraram que a adição de progesterona, estradiol e androstenediona ao
meio de cultivo de base (MEM+) para folículos pré-antrais caprinos pode melhorar as taxas
de ativação, crescimento e sobrevivência in vitro, principalmente em associação ao FSH.
Palavras-chave: folículo pré-antral caprino, cultivo in vitro, progesterona, estradiol,
androstenediona, FSH.
Abstract:
This study investigated the effects of progesterone, estradiol and androstenedione in the
presence or absence of follicle stimulating hormone (FSH) on survival, activation and growth
of caprine preantral follicles. Pieces of ovarian tissue were cultured for 1 or 7 days in
Minimum Essential Medium modified (MEM+) alone or containing progesterone (1, 2.5, 5,
10 or 20 ng/mL-experiment 1), estradiol (1, 5, 10, 20 or 40 pg/mL-experiment 2) or
androstenedione (1, 10, 50 or 100 ng/mL-experiment 3) with or without FSH (50 ng/mL).
Non-cultured tissue (fresh control) and cultured ovarian tissues were processed for
histological and ultrastructural (experiments 1 and 2) or fluorescent analysis (experiment 3).
After 7 days of culture, data from experiement 1 showed that the addition of FSH to all
progesterone concentrations maintained the percentage of normal follicles similar to fresh
control. In the same period of culture, a higher percentage of developing follicles was
observed only in 2.5 ng/mL of progesterone associated with FSH or 10 ng/ml of progesterone
alone when compared with control. From day 1 to day 7 of culture, a significant increase in
the percentage of developing follicles was observed in MEM+ and 2.5 ng/mL of progesterone
+ FSH. In addition, after 7 days, in all treatments, there was a significant increase in follicular
diameter when compared with control, except for MEM+ and in 5 ng/mL of progesterone +
FSH or 10 ng/mL of progesterone alone. Ultrastructural studies confirmed follicular integrity
after 7 days of culture in 2.5 ng/mL of progesterone with FSH. In regard to experiment 2,
after 7 days treatments that yielded the highest percentage of normal follicles compared to
MEM+ were those that combined FSH with estradiol at 1, 5 or 20 pg/mL and all treatments
tested showed percentages of follicular activation increased in relation to fresh control and
MEM+. The addition of FSH and estradiol (1, 5, 10 or 20 pg/mL) in combination significantly
increased follicular diameter as compared with MEM+ after 7 days of culture. Ultra structural
studies confirmed follicular integrity only after 7 days of culture in the presence of 1 pg/ml
estradiol plus FSH. Experiment 3 showed a significant decrease in percentage of normal
follicles and an increase in activation in all treatments with androstenedione after 7 days of
culture in relation to fresh control. In this same period, there was no difference between
MEM+ and the others treatments in regard to follicular activation. After 1 and 7 days, there
were no differences in oocyte and follicular diameter among the treatments and non-cultured
control or MEM+
. Fluorescence analysis demonstrated that only fragments cultured in 50 or
100 ng/ml of androstenedione + FSH have percentages of viable preantral follicles similar to
those observed in MEM+
alone. The results of this study showed that the addition of
progesterone, estradiol and androstenedione to the culture media for caprine preantral follicles
can improve the rates of follicular activation, growth and survival in vitro, mainly in
association with FSH.
Keywords: caprine preantral follicle, in vitro culture, progesterone, estradiol,
androstenedione, FSH.
Tipo do Trabalho:
Tese
Referência:
Lima-Verde, Isabel Bezerra. Utilização de progesterona, estradiol, androstenediona e hormônio folículo-estimulante no cultivo in vitro de folículo pré-antrais caprino. 2009. 111 f. Tese (Doutorado em 2009) - Universidade Estadual do Ceará, , 2009. Disponível em: Acesso em: 29 de abril de 2024
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