Desenvolvimento e Padronizacao de Elisa Indireto para Diagnostico de Maedi-Visna Virus de Ovinos
Autor(es):
Dantas, Tânia Valeska Medeiros
Palavras Chaves:
Não informado
Ano de Publicação:
2004
Resumo:
A Maedi-Visna (MV) pode ser diagnosticada por varias formas, como imunodifusao em gel de agarose (IDGA), Western blot, Ensaio imunoenzimatico (ELISA), Radioimunoensaio, Reacao em cadeia de polimerase (PCR). O IDGA e o metodo recomendado pela Organizacao Internacional de Epizootias (OIE), porem o ELISA e o metodo de escolha para grande numeros de amostras, embora seu custo elevado, tenha dificultado a rotina diagnostica da MV em ovinos. Por isso, pesquisas sao realizadas para conseguir padronizar e comercializar um ELISA brasileiro a fim de facilitar seu uso na rotina diagnostica. O objetivo desta pesquisa foi desenvolver e padronizar um ELISA indireto para diagnostico da MV. O antigeno foi obtido a partir de sobrenadante de cultivo celular de membrana sinoval caprina (MSC) inoculado com o Maedi Visna Virus (MVV) cepa K1514, submetido a tres ciclos de congelamento e descongelamento, e clarificacao por centrifugacao a 3000g por 40min. A suspensao clarificada foi precipitada por polietilenoglicol 8000 (PEG), em seguida foi centrifugada a 12000g por 60min, o pellet foi ressuspendido em Tampao Tris-Hci (TNE) e ultracentrifugado a 42000g por 105min em colchao de sacarose. O pellet foi ressuspendido em PBS contendo phenylmethylsulphonyl fluoride (PMSF). O ELISA foi realizado em microplacas de 96 pocos, com incubacao de uma hora a 37°C e lavagens em cada etapa, o revelador foi o-phenylendiamine (OPD) por 15min ao abrigo da luz. Para a comparacao entre os testes de ELISA e IDGA foram utilizadas 175 amostras de soros. A concentracao otima do antigeno foi 2 ug/ml e a melhor diluicao do soro foi 1:100. O ELISA detectou um maior numero de positivos (41) que o IDGA (11), apresentando uma sensibilidade de 91% especificidade de 82%. O ELISA apresentou uma sensibilidade melhor que o IDGA, porem a especificidade ficou abaixo do esperado, o que nao inviabilizou seu uso como teste de diagnostico do MVV. Palavras-chave: ELISA, Diagnostico, Lentivirus.
Abstract:
Não informado
Tipo do Trabalho:
Dissertação
Referência:
Dantas, Tânia Valeska Medeiros. Desenvolvimento e Padronizacao de Elisa Indireto para Diagnostico de Maedi-Visna Virus de Ovinos. 2004. Sem Numeração Dissertação (Mestrado Acadêmico ou Profissional em 2004) - Universidade Estadual do Ceará, , 2004. Disponível em: Acesso em: 19 de abril de 2024
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