Sexagem e criopreservação espermática de pequenos ruminantes utilizando anticorpo monoclonal sexo-específico associado ao sistema complemento e diluente de origem vegetal
Autor(es):
Brito, Bruna Farias
Palavras Chaves:
Sexagem; Óleo de Coco; Espermatozoide; Anticorpo; Ruminantes
Ano de Publicação:
2021
Resumo:
A busca pelo melhoramento genético na ovinocaprinocultura através da utilização de biotecnologias reprodutivas como a inseminação artificial associada ao uso de sêmen sexado são de grande valia, uma vez que permite um melhor direcionamento de acordo com os sistemas de produção. Desta forma, o trabalho teve como objetivo avaliar a técnica de imunossexagem por meio do anticorpo monoclonal contra proteína sexo-específica associada à via clássica do complemento e a conservação em diluente de origem vegetal a base de água de coco em pó (ACP101/102c) na criopreservação do sêmen ovino e caprino. O experimento foi realizado no Laboratório de Tecnologia do Sêmen Caprino e Ovino em parceria com as propriedades: Chácara Vetcampo, Complexo HCG e fazenda Guaiúba. O experimento foi realizado em três etapas: (1) Avaliação da influência do ACP101/102c na manutenção da atividade mitocondrial de espermatozoides ovinos criopreservado; (2) Criopreservação de sêmen caprino utilizando ACP101/102c associado ao óleo de coco extra virgem; (3) Criopreservação de espermatozoides ovinos e caprinos imunossexados e diluídos em meio ACP101/102c. As amostras espermáticas foram avaliadas quanto à cinética espermática e quanto as integridades de membranas, morfologia e atividade mitocondrial. Na etapa 1, o meio de conservação ACP-102c se mostrou eficiente na manutenção da qualidade dos espermatozoiodes ovinos criopreservado. Na etapa 2, em relação à avaliação da motilidade, das integridades de membranas (IMP e IA), da funcionalidade de membrana (HOST) e da atividade mitocondrial (AM) avaliadas após a descongelação não foram observadas diferenças estatísticas significativas entre o controle e as concentrações de óleo de coco 2,5% e 5,0% (P > 0.05). Na etapa 3, na avaliação do sêmen ovino sexado quanto a motilidade espermática e a IMP não foram observadas diferenças estatísticas significativas entre os tratamentos após a sexagem na avaliação dos dados absolutos/brutos (P > 0.05), sendo observada a diferença apenas entre o não sexado (T1) e os sexados (T2 e T3) (P < 0.05). Em relação ao percentual relativo e a morfologia espermática, não foram observadas diferenças estatísticas significativas (P > 0.05). Quanto a avaliação das amostras de sêmen caprino sexado, os parâmetros de motilidade apresentaram-se condizentes com a técnica submetida, entretanto, os dados de IMP não se apresentaram conforme esperado, sendo necessário outras avaliações para melhor avaliação da técnica para esta espécie. Concluindo-se que a utilização do diluente a base de água de coco em pó (ACP101/102c) é eficaz na manutenção da qualidade espermática de ovinos e caprinos criopreservado, bem como a adição do óleo de coco como crioprotetor na espécie caprina, apresentando-se como um diluente alternativo para programas internacionais de inseminação artificial e transferências de embriões. Concluiu-se também que o processo de imunossexagem por meio do anticorpo monoclonal contra proteína sexo-específica (HY) associada à via clássica do sistema complemento e ao uso do diluente à base de água de coco em pó (ACP10/102c) na criopreservação do sêmen mostrou-se eficiente na avaliação in vitro para a espécie ovina.
Abstract:
The search for genetic improvement in ram and goats through the use of reproductive biotechnologies such as artificial insemination associated with the use of sexed semen is of great value, as it allows for better direction according to production systems. Thus, the objective of this work was to evaluate the immunosexing technique using monoclonal antibody against sex-specific protein associated with the classical pathway of complement and preservation in a diluent of vegetable origin based on powdered coconut water (ACP101/102c) in the cryopreservation of the ram and goat semen. The experiment was conducted in Goat and Ram Semen Technology Laboratory in partnership with the properties: Vetcampo Farmhouse, HCG Complex and farm Guaiúba. The experiment was conducted in three stages: (1) Evaluation of the influence of ACP101/102c in the maintenance of the mitochondrial activity of cryopreserved sheep sperm; (2) Cryopreservation of goat semen using ACP101/102c associated with extra virgin coconut oil; (3) Cryopreservation of immunosexed ovine and caprine sperm and diluted in ACP101/102c extender. Sperm samples were evaluated for sperm kinetics and for membrane integrity, morphology and mitochondrial activity. In step 1, the ACP-102c conservation medium proved to be efficient in maintaining the quality of cryopreserved ram sperm. In step 2, regarding the evaluation of the motility of membrane integrity (IMP and IA), the membrane functionality (HOST) and the mitochondrial activity (AM) evaluated after thawing was not observed statistically significant differences between the control and concentrations of coconut oil 2.5% and 5.0% (P> 0.05). In step 3, In the evaluation of sexed ram semen regarding sperm motility and IMP, no statistically significant differences were observed between treatments after sexing in the evaluation of absolute data (P > 0.05), with the difference being observed only between the non-sex (T1) and the sexed (T2 and T3) (P <0.05). Regarding the relative percentage and sperm morphology, no statistically significant differences were observed (P > 0.05). As for the evaluation of sexed goat semen samples, the motility parameters were consistent with the technique submitted, however, the IMP data were not as expected, requiring further evaluations for a better evaluation of the technique for this species. In conclusion, the use of powdered coconut water diluent (ACP101/102c) is effective in maintaining the sperm quality of cryopreserved ram and goats, as well as the addition of coconut oil as a cryoprotectant in goats, as an alternative diluent for international programs of artificial insemination and embryo transfers. It was also concluded that the immunosexing process through monoclonal antibody against sex-specific protein (HY) associated with the classic pathway of the complement system and the use of powdered coconut water diluent (ACP101/102c) in the cryopreservation of semen proved to be efficient in the in vitro evaluation for the ovine species.
Tipo do Trabalho:
Tese
Referência:
Brito, Bruna Farias. Sexagem e criopreservação espermática de pequenos ruminantes utilizando anticorpo monoclonal sexo-específico associado ao sistema complemento e diluente de origem vegetal. 2021. 88 f. Tese (Doutorado em 2021) - Universidade Estadual do Ceará, Fortaleza, 2021. Disponível em: Acesso em: 19 de março de 2025
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