A ocitocina (OT) é um nonapeptídio que tem sido relacionado a um amplo espectro de efeitos centrais e periféricos, devido seu duplo papel tanto como neurotransmissor quanto como hormônio. É sintetizado principalmente pelo hipotálamo e armazenado na neurohipófise. A OT participa da regulação hormonal da pressão arterial em resposta a alterações de volemia e osmolaridade, sendo assim um contrarregulatório da Vasopressina (AVP). Efeitos renais de aumento da natriurese e diurese promovidos pela OT são descritos na literatura, entretanto não estão completamente elucidados. O permutador NHE3 é o principal responsável pela reabsorção de sódio pelos túbulos proximais, sendo um dos determinantes da excreção urinária desse eletrólito. O presente estudo tem por objetivo analisar a atividade do NHE3 sob o efeito da ocitocina nos túbulos proximais renais de ratos Wistar machos. Para isso, foi utilizado, para análise funcional do NHE3, o método de microperfusão renal estacionária in vivo. Esse método permite a medida da secreção de H⁺ em túbulos proximais, a qual representa uma medida da reabsorção proximal de bicarbonato, que é mediada por volta de 80% por meio do atividade do permutador NHE3. Nossos achados demonstram que, nos animais do grupo OT 10⁻⁹M, OT 10⁻¹°M, OT 10⁻¹¹ M houve diminuição significativa do fluxo de reabsorção de bicarbonato (J HCO₃⁻,): 1,38±0,05 (16); 1,46±0,10(7); 1,62±0,05 (10), respectivamente, quando comparado ao controle: 2,18±0,06(6); acompanhado de um aumento significativo da meia vida de acidificação tubular (t1/2): 5,99±0,29 (165,94±0,40(7); 4,92±0,26(10), respectivamente, em relação ao grupo Controle: 3,92±0,13(6). No entanto, não houve diferenças significativas desses grupos em relação ao grupo Controle, quanto aos parâmetros de concentração de bicarbonato estacionário ([HCO₃⁻]s) e pH estacionário (pHe). Com o intuito de investigar se o efeito inibitório sobre a reabsorção de bicarbonato, provocado pela ocitocina, envolvia a inibição do permutador NHE3, adicionamos à perfusão com ocitocina, 10⁻⁴ M de EIPA (Ethyl-Isopropyl Amiloride), inibidor do permutador NHE. Não houve diferença significativa no JHCO₃⁻ entre os túbulos perfundidos com EIPA 10⁻⁴ M (1,45±0,07 (12)) e EIPA 10⁻⁴M + OT 10⁻⁹M 1,42±0,09 (10)), demonstrando que não houve inibição adicional no fluxo de bicarbonato com a perfusão de EIPA + ocitocina. Esses achados indicam que a ocitocina inibe a reabsorção proximal de bicarbonato por meio da redução da atividade do permutador NHE3. Com o intuito de investigar o possível papel modulador da AVP sobre as ações renais tubulares proximais da OT, utilizamos a AVP 10⁻⁹ M em conjunto com OT 10⁻⁹ M. Ao compararmos o fluxo de reabsorção de bicarbonato do grupo OT 10⁻⁹ M + AVP 10⁻⁹ M (2,15±0,06 (11)) ao grupo OT 10⁻⁹M (1,38±0,05 (16)), é possível afirmar que a AVP preveniu o efeito inibitório da OT, pois seus valores foram elevados aos mesmos patamares do grupo controle (2,18±0,06 (6)) e do grupo AVP 10⁻⁹M (2,05±0,05 (10)). Com o intuito de investigarmos os mecanismos de ação da ocitocina utilizamos didesoxiadenosina (DDA 10⁻⁴ M), um inibidor da adenilil ciclase e também o inibidor de guanilato ciclase solúvel (GC) (ODQ 10⁻⁶ M). Utilizando DDA 10⁻⁴ M (2,11±0,09(10)), obtivemos que o fluxo de reabsorção de bicarbonato do grupo DDA 10⁻⁴ M + OT 10⁻⁹M (1,55±0,09(9)) quando comparado ao grupo OT 10⁻⁹M (1,38±0,05(16)), não apresentou diferenças significativas. Quanto ao fluxo de reabsorção de bicarbonato, comparando o grupo OT 10⁻⁹ M + ODQ 10⁻⁶ M (1,58±0,09 (17)) com o grupo OT 10⁻⁹ M (1,38±0,05 (16)), não verificou-se diferenças significativas, no entanto, quando comparado ao grupo ODQ 10⁻⁶ M (1,87±0,06 (15)), houve diferença significativa, pois a ocitocina continuou inibindo mesmo na presença de ODQ. Nossos resultados indicam que o efeito inibitório da ocitocina sobre a reabsorção tubular proximal de bicarbonato ocorre por meio do NHE3. Na presença de AVP, o efeito inibitório da OT foi abolido. As vias de sinalização que a ocitocina poderia estar atuando não envolve Adenilil ciclase nem Guanilato ciclase solúvel.
Abstract:
Oxytocin (OT) is a nonapeptide that has been linked to a wide spectrum of central and peripheral effects, due to its dual role as both a neurotransmitter and a hormone. It is synthesized mainly by the hypothalamus and stored in the neurohypophysis. OT participates in hormonal regulation of blood pressure in response to changes in blood volume and osmolarity, thus being a counter-regulator of Vasopressin (AVP). Renal effects of increased natriuresis and diuresis promoted by OT are described in the literature, however they are not completely elucidated. The NHE3 exchanger is primarily responsible for the reabsorption of sodium by the proximal tubules, being one of the determinants of urinary excretion of this electrolyte. The present study aims to analyze the activity of NHE3 under the effect of oxytocin in the renal proximal tubules of male Wistar rats. For this, the in vivo stationary renal microperfusion method was used for functional analysis of NHE3. This method allows the measurement of H + secretion in proximal tubules, which represents a measure of proximal bicarbonate reabsorption, which is mediated around 80% through the activity of the NHE3 exchanger. Our findings demonstrate that, in the animals in the OT 10⁻⁹ M, OT 10⁻¹° M, OT 10⁻¹¹ M group there was a significant decrease in the bicarbonate reabsorption flow (J HCO₃⁻,): 1.38 ± 0.05 (16); 1.46 ± 0.10 (7); 1.62 ± 0.05 (10), respectively, when compared to the control: 2.18 ± 0.06 (6); accompanied by a significant increase in the tubular acidification half life (t1/2): 5.99 ± 0.29 (165.94 ± 0.40 (7); 4.92 ± 0.26 (10), respectively, in in relation to the Control group: 3.92 ± 0.13 (6), however, there were no significant differences between these groups in relation to the Control group, regarding the parameters of concentration of stationary bicarbonate ([HCO₃⁻] s) and stationary pH ( In order to investigate whether the inhibitory effect on the bicarbonate reabsorption caused by oxytocin involved the NHE3 exchanger inhibition, we added 10⁻⁴ M EIPA (Ethyl-Isopropyl Amiloride) to the perfusion with oxytocin. There was no significant difference in JHCO₃⁻ between tubules perfused with EIPA 10⁻⁴ M (1.45 ± 0.07 (12)) and EIPA 10⁻⁴ M + OT 10⁻⁹ M 1.42 ± 0.09 (10)), demonstrating that there was no additional inhibition in the flow of bicarbonate with the infusion of EIPA + oxytocin. These findings indicate that oxytocin inhibits proximal bicarbonate reabsorption by reducing the activity of the NHE3 exchanger. In order to investigate the possible modulating role of AVP on the proximal renal tubular actions of OT, we used AVP 10⁻⁹ M together with OT 10⁻⁹ M. When comparing the bicarbonate resorption flow of the OT 10⁻⁹ M + group AVP 10⁻⁹M (2.15 ± 0.06 (11)) to the OT 10⁻⁹M group (1.38 ± 0.05 (16)), it is possible to state that AVP prevented the inhibitory effect of OT, because its values were raised to the same levels as the control group (2.18 ± 0.06 (6)) and the 10⁻⁹ M AVP group (2.05 ± 0.05 (10)). In order to investigate the mechanisms of action of oxytocin we used didesoxiadenosine (ADD 10⁻⁴ M), an adenylyl cyclase inhibitor and also the soluble guanylate cyclase (GC) inhibitor (ODQ 10⁻⁶ M). Using 10⁻⁴ M DDA (2.11 ± 0.09 (10)), we obtained that the bicarbonate resorption flow of the 10⁻⁴ M DDA + 10⁻⁹M OT group (1.55 ± 0.09 (9)) when compared to the 10⁻⁹M OT group (1.38 ± 0.05 (16)), did not present significant differences. As for the bicarbonate reabsorption flow, comparing the OT 10⁻⁹ M + ODQ 10⁻⁶ M group (1.58 ± 0.09 (17)) with the OT 10⁻⁹ M group (1.38 ± 0.05 (16)), there were no significant differences, however, when compared to the 10⁻⁶ M ODQ group (1.87 ± 0.06 (15)), there was a significant difference, as oxytocin continued to inhibit even in the presence of ODQ. Our results indicate that the inhibitory effect of oxytocin on proximal tubular reabsorption of bicarbonate occurs through NHE3. In the presence of AVP, the inhibitory effect of OT was abolished. The signaling pathways that oxytocin could be acting on do not involve soluble Adenylyl cyclase or Guanylate cyclase.
Tipo do Trabalho:
Dissertação
Referência:
Oliveira, Nadia Osorio De. Efeito da ocitocina sobre a atividade do permutador NHE3 em túbulos proximais renais. 2020. 64 f. Dissertação (Mestrado Acadêmico ou Profissional em 2020) - Universidade Estadual do Ceará, Fortaleza, 2020. Disponível em: Acesso em: 19 de março de 2025
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